铁皮石斛对人正常皮肤成纤维细胞GM06396辐射防护作用的研究

摘要

目的：检测不同浓度铁皮石斛对人正常皮肤成纤维细胞GM0639存活率的影响，并通过细胞实验评价铁皮石斛的辐射防护作用的效果。
　　 方法：采用传统的中药煎煮方法制取铁皮石斛煎剂；采用MTT法检测不同药物浓度及不同药物作用时间对细胞存活率的影响，MTT法测定相同剂量60Coγ射线照射后培养24h未加药组和加不同浓度药物组GM0639细胞的存活率；通过胞质分裂阻滞法(CB法)计数铁皮石斛煎剂作用联合不同剂量60Coγ射线照射后的微核率(Micronucleus frequency，MNF)和微核细胞率(Micronucleus cell frequency，MNCF)，将铁皮石斛煎剂作用的细胞与单纯照射细胞的微核率比较和微核细胞率的统计分析结果进行比较；流式细胞仪PI单染法检测GM0639细胞经铁皮石斛及4Gy60Coγ射线作用后细胞周期的变化；AnnexinV-FITC/PI凋亡试剂盒检测不同浓度铁皮石斛对4Gy60Coγ射线作用后细胞凋亡的影响。
　　 结果：铁皮石斛煎剂在给药浓度0～100mg/mL(鲜药的质量比上终溶液量)范围内，铁皮石斛对GM0639没有细胞毒性。4Gy照射后培养24h，随着药物浓度的增加，细胞的存活率均显著增加，加药60mg/ml就可明显提高细胞的存活率。4Gy照射后培养24h，在试验药物浓度为60mg/mL，作用时间为24h时，将CB微核法得到的数据进行回归拟合可以得到药物作用及未经药物作用的剂量效应曲线，比较两组曲线，铁皮石斛作用组的微核率及微核细胞率明显低于单纯照射组(p<0.05)。流式细胞仪PI单染法结果表明，4Gy60Coγ射线作用后GM0639细胞SubG1峰明显增高，随着加入的铁皮石斛浓度的增高，SubG1峰逐渐降低，药物浓度为100mg/mL组与单照组相比SubG1峰由33.14±2.11％降至5.57±1.02％(p<0.05)，表明铁皮石斛具有辐射防护作用；流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡的结果表明，辐射损伤后细胞早期与晚期的凋亡率均增加，而不同浓度的铁皮石斛作用组均降低了凋亡率，浓度为100mg/mL组与单纯照射组相比细胞凋亡率由20.94±0.32％降至4.54±0.32％，证实了铁皮石斛可以保护GM0639细胞因辐射而诱发的细胞凋亡。
　　 结论：铁皮石斛的辐射防护作用有一个最适的浓度范围，通过细胞实验证明了铁皮石斛对人正常皮肤成纤维细胞GM0639具有辐射防护作用。