RNAi转基因家蚕抑制BmNPV的抗性研究

摘要

已有研究表明利用RNAi技术通过干扰BmNPV复制的必需基因ie-1、lef-1和gp64,可以有效抑制BmNPV的增殖。然而,由于选择干扰的靶基因不同,抑制病毒复制的效率相差甚远,即时对于同一个基因,针对不同区域的siRNA其效率也有很大差异。为了探讨表达不同dsRNA的转基因家蚕对BmNPV的抗性,将已构建的带有短,lef-1 dsRNA表达盒的转基因载体pigA3-LEF-Neo,通过精子介导法导入家蚕(皓月)体内,通过GFP荧光和G418抗性双重筛选,结合PCR、点杂交等分子生物学鉴定获得了转基因家蚕。对G6代2龄转基因家蚕接种BmNPV,结果显示转基因家蚕的死亡率比对照组下降了10％-30％,表明转基因家蚕对BmNPV的抗性有所提高；对接种BmNPV的5龄转基因家蚕的定量PCR检测结果显示转基因家蚕体内的lef-1 mRNA水平比对照组平均降低了72倍和26.5倍,最高下降了104倍,进一步表明表达lef-1 dsRNA的转基因家蚕抑制了BmNPV lef-1基因的表达。
　　 同时,为了研究不同品系转基因家蚕对BmNPV的抗性,将带有长ie-1 dsRNA表达盒的转基因载体pigA3-IE-Neo通过精子介导法导入家蚕(菁松)体内,对G1代研究结果表明抑制BmNPV的增殖。
　　 另外,我们还对菁松、皓月、苏菊(A、B系)、明虎(A、B系)和高白×皓月的这五种品系的二龄起蚕进行攻毒实验,同时与上述两种转基因家蚕进行抗性比较。研究结果表明不同品种的家蚕对病毒的抗性存在差异,但是总体上转基因家蚕比其它品种对病毒的抗性都要高。进一步证明了通过转基因技术可以增强家蚕对病毒的抗性。