Th17/Treg和相关细胞因子在结肠癌中的变化及其临床相关性研究

摘要

目的：检测结肠癌患者肿瘤组织中Th17细胞和Treg细胞及其外周血中相关细胞因子，分析Th17/Treg在结肠癌患者的变化情况及其与临床病理组织分型之间的关系，探讨与肿瘤发生和发展的关系及可能的机制。
　　 方法：根据结肠癌Dukes分期将28例结肠癌患者分为两组：早期结肠癌组(n=8)和进展期结肠癌组(n=20)，所有入选病例均未接受过放化疗或其他干预性治疗。分离20例结肠癌患者及20例健康志愿者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclearcell，PBMC)，并于术中切取的结肠癌患者(n=28)大体标本中取材肿瘤组织及癌旁正常组织，分别作为实验组及对照组。1．运用流式细胞术(Fluorescence-activated cellsorting，FACS)分析结肠癌患者肿瘤组织及癌旁组织中Th17细胞及Treg细胞/CD4+T细胞的比例。2．采用免疫组织化学技术(Immunohistochemistry，IHC)检测肿瘤组织及癌旁组织中Th17细胞及Treg细胞的分布。3．采用逆转录聚合酶链反应技术(ReverseTranscription Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)检测结肠癌患者外周血中Th17/Treg细胞相关细胞因子IL-23和IL-10。
　　 结果：1．早期结肠癌肿瘤组织中Th17细胞/CD4+T细胞和Treg细胞/CD4+T细胞的比例明显高于癌旁正常组织(8.38±2.86％ VS3.56±1.26%和7.13±1.65% VS2.74±1.09%，P＜0.05)；进展期结肠癌肿瘤组织中Th17细胞/CD4+T细胞和Treg细胞/CD4+T细胞的比例明显高于进展期癌旁正常组织(9.23±1.37% VS4.82±1.560%和16.57±3.78% VS3.45±1.670%，P＜0.05)；且进展期结肠癌肿瘤组织中Treg细胞/CD4+T细胞的比例高于早期(16.57±3.78% VS7.13±1.65%，P＜0.05)；但进展期结肠癌肿瘤组织中Th17细胞/CD4+T细胞的比例较早期无明显差异(9.23±1.37% VS8.38±2.86%，P＞0.05)；而进展期结肠癌肿瘤组织中Th17/Treg细胞的比例比早期偏低(P＜0.05)。2．免疫组织化学技术检测结肠癌肿瘤组织及癌旁正常组织中Th17细胞及Treg细胞结果表明，早期结肠癌肿瘤组织内Th17阳性细胞数和Treg阳性细胞数明显高于早期癌旁正常组织(17.2±1.3 VS2.6±3.6和16.5±2.4 VS3.8±2.5，P＜O.01)；进展期结肠癌肿瘤组织内Th17阳性细胞数和Treg阳性细胞数明显高于进展期癌旁正常组织(19.3±2.8 VS2.8±2.1和30.3±3.2 VS4.1±1.2，P＜0.01)；早期结肠癌肿瘤组织内Th17阳性细胞数较进展期无明显差异（17.2±1.3 VS19.3±2.8，P＞0.05）；而早期结肠癌肿瘤组织内Treg阳性细胞数明显低于进展期(16.5±2.4 VS30.3±3.2，P＜0.05)。3．RT-PCR检测结果显示，结肠癌患者外周血中IL-23、IL-10mRNA转录水平升高，与健康对照组差异明显(P＜0.05)，且IL-10mRNA表达水平结肠癌进展期与早期之间差异显著(0.98±0.07% VS0.62±0.05%，P＜0.05)，而IL-23在两组间无明显差异(0.72±0.020 VS0.68士0.03%，P＞0.05)。
　　 结论：随着疾病的进展，肿瘤组织内的Th17细胞及Treg细胞/CD4+T细胞比例及阳性细胞数逐渐升高，且Treg细胞比Th17细胞升高更加明显。细胞因子在Th17细胞及Treg细胞的分化发育过程中发挥重要作用，相关细胞因子IL-23和IL-10在结肠癌外周血中的变化趋势和Th17细胞及Treg细胞在肿瘤组织中的变化趋势相一致，提示Th17细胞及Treg细胞在结肠癌的表达可能与肿瘤免疫环境相关的细胞因子调节有关，为进一步揭示Th17/Treg平衡调节机制和结肠癌的免疫治疗提供一种理论和实验依据。

目录

声明

序言

第一章 流式细胞术分析Th17细胞及Treg细在结肠癌组织中的分布

1.1 材料

1.2 方法

1.3 结果

1.4 讨论

1.5 结论

第二章 免疫组织化学法分析Th17细胞和Treg细胞在结肠癌组织中的分布

2.1 材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 结论

第三章 RT-PCR检测结肠癌患者外周血中Th17细胞和Treg细胞相关细胞因子

3.1 材料

3.2 方法

3.3 结果

3.4 讨论

3.5 结论

参考文献

全文总结

综述

中英文对照缩略词表

攻读学位期间发表的文章

致谢