有机杀虫剂双氢鱼藤酮对人浆细胞的促凋亡作用及其机理研究

摘要

研究背景和目的：双氢鱼藤酮（DHR）是天然杀虫剂鱼藤酮的代谢产物，与鱼藤酮一样广泛应用于农业生产，包括渔业、园艺和有机农产品等。DHR是一个有效的线粒体抑制剂并可能引起帕金森样综合症，然而DHR对其他系统的作用尚不清楚。因为浆细胞在免疫屏障系统中发挥重要作用，本课题拟研究DHR对人浆细胞的毒副作用，为DHR的安全性评价提供新的证据。
　　研究方法：用噻唑蓝（MTT）法检测DHR是否抑制浆细胞增殖，流式细胞技术检测DHR对浆细胞周期、凋亡和线粒体膜电位的影响。免疫印迹检测DHR对浆细胞的细胞周期蛋白、凋亡蛋白、内质网应激相关蛋白和p38有丝分裂原激活蛋白激酶表达的调控。
　　研究结果：
　　（1）MTT试验表明了DHR能以浓度依耐性的方式抑制人浆细胞存活率，免疫印迹显示DHR下调参与G1期调控点的周期调节剂cyclin D3、CDK4/6、cyclin E和p-Rb的表达以及上调抑癌因子p53的表达，且使浆细胞细胞周期滞止在G0/G1期。
　　（2）流式细胞技术表明DHR能引起浆细胞的凋亡，且免疫印迹证明caspase-3、8、9以及PARP均被剪切，抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达被下调，促凋亡蛋白Bim表达被上调。
　　（3）利用四甲基罗丹明甲酯（TMRM）染色，经流式细胞技术表明 DHR能降低浆细胞的线粒体膜电位。
　　（4）用DHR处理浆细胞不同浓度或不同时间，内质网应激和未折叠蛋白反应的标志蛋白GRP78、ATF4和CHOP均被上调。
　　（5）浆细胞经过不同浓度DHR处理后，有丝分裂原激活蛋白激酶p38磷酸化增加，而JNK磷酸化减少。当用p38抑制剂SB203580预处理浆细胞，由DHR引起的p38磷酸化水平和凋亡蛋白（caspase-3和PARP）的剪切均会被部分下调。
　　研究结论：DHR能抑制人浆细胞增殖并使细胞周期阻滞在G0/G1期，且通过激起内质网应激和激活p38通路引起人浆细胞的凋亡。

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中文摘要

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前 言

材料与方法

一、材料

二、方法

第一部分 双氢鱼藤酮抑制人浆细胞增殖并使细胞周期滞止在G0/G1期

1．双氢鱼藤酮对人浆细胞的增殖抑制作用

2． 双氢鱼藤酮使人浆细胞细胞周期阻滞在G0/G1期

3. 双氢鱼藤酮抑制D-型细胞周期素（Cyclin D）的表达

4.双氢鱼藤酮对CDK通路的调控作用

5.双氢鱼藤酮抑制与细胞增殖有关的蛋白激酶的表达

第二部分 双氢鱼藤酮促进人浆细胞的凋亡

1．双氢鱼藤酮引起浆细胞的凋亡

2. 双氢鱼藤酮对凋亡蛋白的调控

3. 双氢鱼藤酮对线粒体中蛋白的调控

第三部分 双氢鱼藤酮降低人浆细胞线粒体膜电位

第四部分 双氢鱼藤酮引起人浆细胞的内质网应激和未折叠蛋白反应

第五部分 双氢鱼藤酮对人浆细胞MAPK途径的影响

1．双氢鱼藤酮激活人浆细胞中的p38 MAPK

2. p38激酶激活导致DHR诱导的人浆细胞凋亡

讨 论

结 论

参考文献

综述 鱼藤酮毒理学研究进展

攻读硕士学位期间发表论文

中英文缩写词表

致谢