胶原支架(CS)分别联合bFGF、MSCs在大鼠脊髓损伤中的应用

摘要

第一部分：胶原支架（CS）交联bFGF对大鼠脊髓半切损伤的修复作用
　　目的：本实验通过建立大鼠脊髓半侧切损伤模型，评价胶原支架（CS）与成纤维细胞生长因子(bFGF)交联对脊髓损伤的修复作用。
　　方法：
　　一、建立大鼠左侧T9脊髓半横断损伤模型：103只健康雄性6周龄SD大鼠随机分为3组：
　　1，假手术组；
　　2，CS移植组；
　　3，CS+bFGF移植组。
　　二、术后每周进行一次BBB评分，分别在术后4周和8周施行足迹分析、组织学检查和以及免疫组化(anti-NF、anti-GFAP)等检查。
　　结果：
　　1.根据排除标准，有7只大鼠因不完全半横断而被淘汰，最后留96只大鼠。生存曲线分析发现CS/bFGF组的生存率远高于对照组与CS组。
　　2.在8周末，CS/bFGF组与CS组的左下肢BBB评分明显高于对照组。然而，各组右侧肢体的BBB评分没有明显差异。
　　3.术后4周和8周施行足迹分析显示，CS/bFGF组的肢体间协调功能比CS组与对照组明显改善。
　　4.4周和8周免疫组化分析可见：CS/bFGF组anti-NF染色密度明显均比CS组与对照组高，而GFAP染色密度最低，表明损伤周围有较多的神经纤维再生，对胶质瘢痕有抑制作用。
　　结论：CS/bFGF植入大鼠脊髓半切损伤模型能够促进轴突的再生，促进肢体功能的恢复。同时也提高了大鼠的生存率。
　　第二部分：胶原支架（CS）负载MSCs对大鼠脊髓半切损伤模型修复作用
　　一、大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的制备与鉴定
　　目的：通过体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，观察细胞形态，鉴定表面标记物进行，为修复脊髓损伤提供骨髓间充质干细胞来源。
　　方法：无菌条件下收集幼年SD大鼠骨髓，收集单个核细胞，培养于10%胎牛血清培养液中。使用流式细胞仪鉴定CD29,CD90,CD34和CD45表面标志。以后细胞按常规方法传代、冻存，培养三代后的细胞用于实验研究。
　　结果：原代接种1d即可见较多细胞贴壁。培养至7-9d左右细胞汇合达到80％左右，细胞呈极性排列，集落呈漩涡状。经流式细胞仪检测，MSCs均一地表达CD29、CD90；而CD34、CD45阴性。
　　结论：成功分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞。
　　二、胶原支架（CS）负载MSCs修复大鼠脊髓半切损伤
　　目的：通过建立大鼠脊髓半侧切损伤模型，分析和评价胶原支架负载MSCs修复脊髓损伤后神经功能恢复的效果。
　　方法：
　　一、建立大鼠T9左侧脊髓半横断损伤模型：105只健康雄性6周龄SD大鼠随机分为4组：
　　1，假手术组(n=20)；
　　2，对照组（n=30）；
　　3，CS移植组（n=31）；
　　4，CS+MSC移植组（n=24）。
　　二、术后每周一次BBB评分，分别术后4周和8周行足迹分析、组织学检查和以及免疫组化(anti-NF、anti-GFAP、anti-NSE)等检查。
　　结果：
　　一、10只老鼠因不完全半横断而被淘汰（对照组4只，CS组3只，CS/MSC组3只），最后留95只老鼠。
　　二、CS/MSC组的左后肢功能的恢复较其他组快。在8周末，CS/MSC组与CS组的BBB评分明显高于对照组。
　　三、足迹分析显示，CS/MSC组的肢体间协调功能比CS组与对照组明显改善
　　四、4周和8周免疫组化分析可见：CS/MSC组anti-NF染色密度明显均比CS组与对照组高，而GFAP染色密度最低。
　　结论：植入载有MSCs的CS具有改善局部微环境，修复脊髓缺损、神经保护，促进轴突再生的功能，从而促进肢体功能的恢复。

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前言

参考文献

第一部分：胶原支架（CS）交联bFGF对大鼠脊髓半切损伤的修复作用

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分：胶原支架（CS）负载MSCs对大鼠脊髓半切损伤模型修复作用

一、大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）的分离与鉴定

材料与方法

结果

讨论

参考文献

二、胶原支架（CS）负载MSCs修复大鼠脊髓半切损伤

材料与方法

结果

讨论

参考文献

结论和展望

结论

展望

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