钛颗粒负荷下淫羊藿苷对成骨细胞增殖、分化的影响及其机制的研究

摘要

目的：探讨钛颗粒（titanium particle, Ti）负荷下淫羊藿苷(Icariin, ICA)对成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化的影响及其可能的作用机制。
　　方法：实验分为空白组，Ti颗粒组和药物组；制备含有Ti和不同浓度ICA的成骨诱导培养基，检测淫羊藿苷的细胞毒性；采用CCK-8法检测0.1mg/mlTi和不同浓度ICA（10-7-10-4 M）处理MC3T3-E1细胞1天，3天，7天后的细胞增殖活性；以茜素红钙化染色法检测成骨细胞钙化情况；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原蛋白-α(collagenⅠα, COLⅠα)的含量，以逆转率-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测Runx-2、Osterix基因mRNA表达情况。
　　结果：细胞毒性实验结果显示ICA的为10-7，10-6 M，10-5 M，10-4 M时MC3T3-E1细胞存活率（%）分别为：96.68±4.00，98.23±7.55，93.88±8.29，88.08±5.26，均大于50%，且各浓度组间差异无统计学意义。CCK-8结果表明，细胞培养3天和7天后，与对照组（0.1mg/mlTi）比较，含有ICA（10-7-10-5 M）的药物组细胞增殖活性增高，差异有统计学意义，而与空白组比较，差异无统计学意义；药物组中10-4 M ICA作用3天和7天后细胞增殖能力明显降低，与空白组比较，差异有统计学意义。MC3T3-E1细胞连续培养21d后，茜素红染色结果显示空白组、药物组红染区域较多，Ti颗粒组红染区域较少，光镜下计数矿化结节数，并运用Image-proplus软件对各组细胞形成的钙结节数量进行了统计和作图，由表3和图4可见， ICA（10-7-10-5 M）矿化结节数分别为1884.33±179.19，2050.00±169.92，1872.67±85.33，与Ti组（钙结节数528.33±55.89）比较，差异有统计学意义。
　　ELISA结果显示，钛颗粒负荷下细胞培养7天后，药物组（ICA10-7-10-5 M）ALP（IU/L）含量分别为：4.76±0.54，4.99±0.69，4.84±0.91；COLⅠα（μg/L）含量分别为：21.41±2.32，22.85±2.60，21.43±2.19；OCN（ng/ml）含量分别为：57.99±3.07，59.96±4.48，57.78±4.40；与对照组ALP（IU/L）含量为：3.72±0.39，COLⅠα（μg/L）含量为：17.97±2.07，OCN（ng/ml）含量为：50.37±4.76，差异有统计学意义。
　　RT-PCR结果显示，钛颗粒负荷下细胞培养7天后，药物组（ICA10-7-10-5 M）Runx-2基因mRNA CT值分别为：20.91±4.40，31.40±6.36，14.34±0.94；Osterix基因mRNA CT值分别为：1.17±0.17，1.25±0.42，1.03±0.29；与对照组Runx-2及Osterix基因mRNA CT值分别为：1.13±0.44，0.29±0.05，差异有统计学意义。
　　结论：淫羊藿苷能有效的逆转钛粒子对成骨细胞的抑制作用，促进成骨细胞增殖、矿化、分化以及成骨相关基因Runx-2及Osterix表达。

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引言

参考文献

材料与方法

一 实验材料

二 实验方法

结果

1淫羊藿苷的细胞毒性检测结果

2钛颗粒负荷下淫羊藿苷对细胞增殖的影响

3钛颗粒负荷下淫羊藿苷对成骨细胞分化的影响

4 钛颗粒负荷下淫羊藿苷对MC3T3-E1细胞成骨分化相关基因表达的影响

讨论

研究结论

参考文献

附图

综述：人工关节假体无菌性松动的因素及防治进展

参考文献

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攻读学位期间公开发表的论文

致谢