褪黑素对脑缺血再灌注后脑组织中Nox2和Nox4表达影响的实验研究

摘要

目的:迅速溶栓复流治疗是缺血性脑卒中急性期治疗成功的前提和基础,但是该过程引起的氧化应激是导致脑组织二次伤害即缺血/再灌注(I/R)损伤的重要因素。而NADPH氧化酶,尤其是其中的Nox2和Nox4在I/R引起的氧化应激中发挥着重要作用。褪黑素是迄今为止最强的内源性自由基清除剂,且有文献报道表明褪黑素可以抑制脑缺血再灌注引起的脑损伤,但是其作用机制尚不明确。我们拟利用本研究探讨在缺血再灌注条件下,褪黑素发挥脑保护作用的具体机制,明确褪黑素是否通过调节Nox2和Nox4发挥作用。
　　方法:利用30只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,将其随机分为三组:假手术组,缺血再灌注组,褪黑素预处理+缺血再灌注组。利用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型(通过大鼠大脑中动脉栓塞后相应神经功能障碍表现验证模型制备成功)。
　　然后利用荧光分光光度计检测脑组织ROS水平、TUNEL染色检测脑组织细胞凋亡情况、Western blot检测Nox2和Nox4蛋白水平、同时检测TUNEL与Nox2、Nox4的免疫荧光共染的细胞数目。相应实验数据结果应用SPSS18.0统计分析软件,对数据进行统计学分析。
　　结果:
　　1)与假手术组相比,缺血再灌注组ROS水平显著提高,尤其是在缺血半球尤为显著,褪黑素预处理可以显著抑制缺血再灌注引起的缺血半球以及对侧半球中ROS水平的上升。
　　2)与假手术组相比,缺血再灌注组凋亡细胞显著增多,尤其是在缺血半球尤为显著;而褪黑素预处理可以显著抑制缺血再灌注引起的缺血半球以及对侧半球中细胞的凋亡。
　　3)与假手术组相比,缺血再灌注组Nox2和 Nox4的蛋白水平显著上升;而褪黑素预处理可以显著抑制缺血再灌注引起的Nox2和 Nox4的蛋白水平上升。提示:褪黑素可能通过降低Nox2和 Nox4的表达,抑制ROS的产生,进而抑制细胞凋亡。
　　4)免疫荧光共染表明:TUNEL阳性细胞伴随着Nox2或者Nox4的高表达;褪黑素预处理显著降低了Nox2/TUNEL双阳性细胞和Nox4/TUNEL双阳性细胞的数目。
　　结论:
　　在脑缺血再灌注过程中,褪黑素可能通过抑制Nox2和Nox4的表达发挥抗氧化和抗凋亡的作用。

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英文摘要

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前言

材料与方法

1. 材料试剂与主要仪器设备

2. 实验方法

结果

讨论

结论

参考文献

附图

综述 Nox家族在缺血性脑卒中中的研究进展

英文缩写及中英文对照表

攻读学位期间公开发表的论文

致谢