4-1BB信号在Treg中的免疫调控作用及同种异源Treg对肿瘤细胞直接效应初步研究

摘要

第一部分多发性骨髓瘤患者Treg表达水平及4-1BB信号在Treg中的免疫调控作用
　　目的：
　　（1）研究多发性骨髓瘤患者Treg的表达水平
　　（2）探讨4-1BB信号对Treg细胞的促增殖作用。
　　方法：
　　（1）采用免疫荧光和流式细胞术检测多发性骨髓瘤患者外周血和骨髓Treg表达；
　　（2）采用免疫磁珠法分选CD4+CD25+CD127low/-细胞，利用流式细胞术测定其表面4-1BB表达，同时加入IL-2后测定其4-1BB表达有无改变；
　　（3）采用免疫磁珠法富集骨髓瘤原代细胞，与同源PBMC进行肿瘤淋巴细胞混合培养，CFSE法测定阻断4-1BB/4-1BBL信号通路后CD4+CD25high细胞的增殖改变
　　结果：
　　（1）多发性骨髓瘤患者外周血Treg水平较正常对照组高，多发性骨髓瘤患者的Treg水平与临床特征和预后无明显相关性；
　　（2）Treg细胞表面构成性表达4-1BB分子，IL-2可上调Treg表面4-1BB表达，
　　（3）原代骨髓瘤细胞表面高表达4-1BBL分子，通过4-1BB-FC交联4-1BBL阻断4-1BB活化信号能够抑制Treg增殖.
　　结论：多发性骨髓瘤患者Treg细胞表达水平上调，Treg细胞表面构成性表达4-1BB分子，其介导的4-1BB正向信号可促进Treg细胞增殖，提示4-1BB信号可能为调节肿瘤微环境的干预靶点。
　　第二部分同种异源Treg对肿瘤细胞直接效应的初步研究
　　目的：探讨抗原特异性的Treg细胞对肿瘤细胞的直接效应
　　方法：
　　（1）分离正常供体单核细胞，以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和重组白细胞介素(IL-4）诱导培养获得不成熟树突状细胞；
　　（2）以负载肿瘤抗原的树突状细胞诱导抗原特异性 Treg体外生成和扩增
　　（3）把抗原特异性Treg与骨髓瘤细胞系进行体外共培养，采用Annexin-V/PI染色法测定骨髓瘤细胞凋亡水平有无改变，采用CFSE测定骨髓瘤细胞增殖是否受抑，采用细胞内因子染色法测定骨髓瘤细胞合成IL-6水平有无改变，
　　（4）测定活化后CD95L在Treg表面有无上调.
　　结果：
　　（1）通过形态和表型特征鉴定证实培养所得不成熟树突状细胞；
　　（2）采用树突状细胞能够诱导Treg体外扩增，7天后扩增效率达10倍
　　（3）扩增所得抗原特异性Treg能够诱导肿瘤细胞凋亡并抑制其增殖，细胞内因子染色提示抗原特异性Treg降低骨髓瘤细胞自分泌IL-6；
　　（4）活化后Treg表面CD95L未上调表达
　　结论：建立树突状细胞诱导抗原特异性 Tr e g体外扩增模型，明确了抗原特异性Treg能够抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡，其杀伤作用为CD95/CD95L非依赖性。

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引言

一．Treg来源及特征

二．Treg调节免疫作用机制

三．4-1BB信号对Treg的免疫调控作用

参考文献

第一部分 多发性骨髓瘤患者Treg表达水平及4-1BB信号在Treg中的免疫调控作用

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 同种异源Treg对肿瘤细胞直接效应的初 步研究

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

结论

综述: 调节性T细胞分化和功能的机制研究

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