下丘脑弓状核内CBS参与慢性胰腺炎大鼠腹部痛觉过敏的机制研究

摘要

目的:
　　硫化氢（H2S）是继NO、CO后被发现的第三种气体信号分子，有报道显示初级感觉神经元中的 H2S能够参与内脏痛敏的形成，但其在中枢神经系统中的作用却鲜为人知。此研究旨在探讨下丘脑弓状核（ARC）区内 H2S内源性合成酶胱硫醚-β-合成酶（CBS）和胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）是否参与了慢性胰腺炎腹部痛觉过敏的形成及其可能的机制。
　　方法:
　　1.在180-200 g雄性SD大鼠胰管内注射三硝基苯磺酸（TNBS）诱导产生慢性胰腺炎（CP）模型。
　　2.运用von Frey filament（VFF）评测正常大鼠和CP大鼠在ARC微量给药前后的腹部机械痛反应频率。
　　3.运用Western Blotting检测胱硫醚-β-合成酶（CBS）、胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）、蛋白激酶 Cγ（PKCγ）、总 GluN2B和酪氨酸磷酸化的 GluN2B（p-GluN2B）在大鼠ARC中的表达水平。
　　结果:
　　1.TNBS注射4周后能显著上调ARC内胱硫醚-β-合成酶（CBS）的表达，而没有改变胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）的表达。
　　2.与对照组相比，CP虽然并没有改变 GluN2B表达的总量，但显著提高了GluN2B的酪氨酸磷酸化水平。CP也显著上调了ARC内PKCγ的表达。
　　3.ARC内微量注射CBS的抑制剂O-（羧甲基）羟胺半盐酸盐（AOAA）能显著降低CP大鼠的腹部疼痛，也翻转了CP大鼠ARC中p-GluN2B和PKCγ上调。
　　4.微量注射 PKC特异性抑制剂白屈菜赤碱（CC）能显著减轻 CP大鼠的腹部痛觉过敏，并抑制p-GluN2B的增加。
　　5.微量注射NMDA受体拮抗剂D-AP5、GluN2B特异性拮抗剂艾芬地尔均能显著降低CP大鼠的腹部痛觉过敏。
　　6.微量注射H2S供体NaHS能使正常大鼠产生腹部痛觉过敏。
　　结论:
　　总之，我们的数据表明，CP引起了 ARC内 CBS的上调，并可能通过 PKCγ介导了GluN2B的活化，参与慢性胰腺炎痛觉过敏。本研究在一定程度上揭示了慢性胰腺炎痛觉过敏产生的中枢机制，并有助于发现慢性胰腺炎疼痛治疗的新靶标。

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第一章 引 言

第二章 材料与方法

2.1 实验对象

2.2 慢性胰腺炎（Chronic Pancreatitis，CP）模型的建立

2.3 大鼠腹部机械痛反应频率检测

2.4 大鼠后足50%缩足阈检测

2.5 大鼠运动功能测试

2.6 埋置套管及微量给药

2.7 Western Blotting检测蛋白表达水平

7.4，再按5 ml/L加入Tween-20）

第三章 实验结果

3.1 CBS参与介导CP大鼠腹部痛觉过敏

3.2 CBS介导CP大鼠腹部痛敏可通过GluN2B磷酸化实现

3.3 CBS引起GluN2B磷酸化是由PKCγ介导的

3.4 H2S供体NaHS能诱导大鼠腹部痛敏

第四章 讨 论

结论

参考文献

综述

3.1 脑神经重塑

3.2 下行易化

3.3 脊髓神经病变

4.1 中枢靶向药物

4.2 脊髓电刺激（Spinal Cord Stimulation，SCS）

4.3 经颅磁刺激（rTMS）

攻读硕士学位期间公开发表的论文与会议摘要

致谢