EGFR基因19外显子缺失突变检测方法的研究

摘要

目的：利用 PCR、酶切及蓝白斑筛选技术，通过野生型、突变型质粒混合模拟不同比例检测EGFR基因19外显子缺失突变，建立一种快速、灵敏、廉价的 EGFR基因诊断技术。
　　方法：根据EGFR基因19外显子del E746-A750和del L747–S752 ins S缺失突变，即15碱基和18碱基缺失突变为检测靶点，分别设计相关配对引物，构建野生型及突变型质粒模版；设计一组特异性PCR引物，并以EGFR野生型、突变型质粒为模板模拟实际标本中野生型与突变型基因比例，进行插入片段的 PCR扩增；结合蓝白斑筛选技术原理，野生型阅读框架中因含有终止密码子 TAA，菌落呈白色，缺失突变型因丢失特定的一段核酸片段而不含有终止密码子 TAA，故菌落呈现蓝色，以此确定样品有无EGFR基因19外显子的缺失突变；通过限制性内切酶酶切野生型片段，可以减少白色菌落克隆数量，间接富集突变型DNA，提高检测效率。
　　结果：EGFR基因野生型插入片段分子克隆的菌落为白色，突变型插入片段分子克隆的菌落为蓝色。通过模拟野生型、突变型质粒不同比例，实验得出在仅有万分之一突变模板浓度（野生模板：突变模板=10000：1）时，该体系仍能检测到突变基因的存在。
　　结论：本实验方法在不同比例模板检测中具有较高的灵敏性和特异性，对肿瘤的早期诊断和肿瘤复发监控具有应用价值，有巨大的经济和社会效益。

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引言

研究材料

1、主要仪器

2. 主要试剂

3.相关生物信息学软件及网站

研究方法

一、主要溶液的配制

二、实验方法及步骤

研究结果

讨论

结论

参考文献

综述: EGFR基因缺失突变及其检测技术

致谢