雷公藤内酯醇抑制IL-1β、IL-6、TNF-α过表达对小鼠溃疡性结肠炎治疗作用的研究

摘要

第一部分趋化因子IL-1β、IL-6在溃疡性结肠炎中的表达及其意义
　　目的:探讨IL-1β、IL-6在溃疡性结肠炎中的表达及意义。
　　方法:纳入2012年12月-2015年12月南通大学附属医院收治的42例活动期溃疡性结肠炎患者，以20名健康志愿者作为正常对照，采用免疫组化法检测溃疡性结肠炎病变结肠组织IL-1β、IL-6表达情况，并分析其与溃疡性结肠炎病情程度的关系。同时建立与人UC相似的DSS小鼠结肠炎动物模型：Balb/c雌性小鼠（n=20）随机分为二组，空白对照组（n=10）和DSS模型组（n=10）。空白对照组小鼠自由饮用蒸馏水7天， DSS模型组小鼠饮用5％DSS溶液7天，每天观察各组小鼠的精神、活动、饮食及粪便等疾病活动指数（DAI），第8天颈椎脱臼法处死各组小鼠，观察大体形态学评分、结肠组织学病理评分(HPS)，同时采用ELISA、RT-PCR方法检测血清中IL-1β和IL-6含量以及局部病变黏膜中IL-1β和IL-6表达情况，进一步验证IL-1β和IL-6在UC发病中的作用。
　　结果:免疫组化分析显示人健康对照组结肠组织中IL-1β、IL-6多为无表达或仅少量表达，而人活动期UC组结肠病变组织中IL-1β、IL-6的表达均明显增强，免疫组化积分显著高于健康对照组，差异有统计学意义（4.03±0.62对0.46±0.10、4.32±0.86对0.62±0.15，P＜0.05）；且UC病变程度越重，IL-1β、IL-6表达强度越高。动物实验DSS模型组小鼠结肠炎症状明显，DAI指数、大体形态观察及评分、病理组织观察及评分与空白对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；同时ELISA检测显示在DSS所致的小鼠结肠炎模型中IL-1β、IL-6的血清浓度明显增高，RT-PCR检测显示局部组织中IL-1β、IL-6 mRNA表达明显上调，DSS模型组与空白对照组两组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　结论: IL-1β、IL-6在人溃疡性结肠炎及小鼠结肠炎模型结肠病变组织中表达上调，可能与结肠局部黏膜炎症相关，参与了溃疡性结肠炎的发病。
　　第二部分雷公藤内酯醇抑制IL-1β、IL-6、TNF-α过表达对溃疡性结肠炎的影响
　　目的:探讨雷公藤内酯醇能否通过抑制IL-1β、IL-6、TNF-α过表达而治疗葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠结肠炎。
　　方法: Balb/c雌性小鼠80只,随机分8组(10只/组)，空白对照组小鼠自由饮用蒸馏水，其余七组小鼠饮用5%DSS溶液，建立与人UC相似的DSS小鼠结肠炎动物模型。A组空白对照组：不予以任何处理；B组生理盐水治疗组：DSS造模成功后腹腔注射生理盐水0.2ml qd；C组丙二醇对照组：造模成功后腹腔注射20%丙二醇0.2ml qd；D组地塞米松对照组：地塞米松0.1mg/kg/d溶于生理盐水中腹腔注射 qd；E组美沙拉嗪治疗组：造模成功后美沙拉嗪20～30mg/kg/d溶于水中胃管注入，Tid；F组TL低剂量治疗组：造模成功后TL溶于20%丙二醇，腹腔注射药量为0.20mg/kg qd；G组TL中剂量组：造模成功后TL溶于20%丙二醇，腹腔注射药量为0.40mg/kg qd；H组TL高剂量治疗组：造模成功后TL溶于20%丙二醇，腹腔注射药量为0.60mg/kg qd。每天观察各组小鼠的精神、活动、饮食及粪便等疾病活动指数（DAI），第8天颈椎脱臼法处死各组小鼠，观察大体形态学评分、结肠组织学病理评分(HPS)，评估雷公藤内酯醇治疗前后的各组小鼠结肠炎症变化情况。ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-α在各组小鼠血清中的浓度、RT-PCR检测小鼠结肠黏膜IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达，免疫组化、Western Blot方法检测结肠黏膜IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达变化，分析雷公藤内酯醇对UC的治疗效应与抑制IL-1β、IL-6、TNF-α过表达的相关性。
　　结果: TL治疗后各组小鼠一般情况好转，结肠炎症状明显减轻，DAI指数、大体形态观察及评分、病理组织观察及评分均提示小鼠结肠局部炎症明显缓解，结肠黏膜糜烂、溃疡好转，其中TL中、高剂量治疗组与生理盐水治疗组、丙二醇治疗组相比，差异有统计学意义（P<0.05），结果提示TL对溃疡性结肠炎有治疗作用。同时发现给予TL治疗后血清中IL-1β、IL-6、TNF-α浓度明显下降，局部结肠组织中IL-1β、IL-6、TNF-α在mRNA、蛋白水平表达均明显下调，与生理盐水治疗组、丙二醇治疗组相比，TL中、高剂量治疗组差异有统计学意义（P<0.05），与地塞米松组、美莎拉嗪治疗组比较差异无统计学意义（P>0.05）；提示TL对UC的治疗作用可能与抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的过表达相关，其抑炎效应与地塞米松、美沙拉嗪类似。
　　结论:雷公藤内酯醇对实验性小鼠溃疡性结肠炎有治疗作用，其作用可能与抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的过表达相关，雷公藤内酯醇可能是一种有用的治疗UC的方法，值得深入研究。

目录

声明

第一部分 趋化因子IL-1β、IL-6在溃疡性结肠炎中的表达及其意义

第一章 前 言

1.1 课题来源、研究的目的和意义

1.2 国内外研究概况

1.3 论文的主要研究内容

第二章 材料与方法

2.1 研究资料及仪器设备

2.2 人体实验部分

2.3 动物实验部分

2.4 统计学处理

第三章 结 果

3.1 人体标本免疫组织化学结果

3.2动物实验结果

第四章 讨 论

第五章 结 论

参考文献

第二部分 雷公藤内酯醇抑制IL-1β、IL-6、TNF-α表达对小鼠溃疡性结肠炎的影响

第一章 前 言

1.1 课题来源、研究的目的和意义

1.2 国内外研究概况

1.3 论文的主要研究内容

第二章 材料与方法

2.1 主要仪器与试剂

2.2实验方法

2.3 DSS结肠炎的评价

2.4检测指标

2.5 统计学处理

第三章 结 果

3.1 实验动物观察（DAI评分）

3.2 大体形态观察及评分

3.3组织学观察及评分

3.4 ELISA结果

3.5 免疫组织化学结果

3.6 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)结果

3.7 Western-blot结果

讨论

第五章 结 论

参考文献

总结

综述:CCL21在消化系统疾病中研究进展

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