黄芪、脉络宁注射液载入修饰胶原对促血管新生的协同作用

摘要

【背景】由人工方法合成临床所需要的组织和器官，并寻找可使支架内快速血管化的方法称为组织工程学。血管生成（Angiogenesis，angei-anagenesis）在促进细胞生长和组织修复起着重要的作用。有研究表明，黄芪、脉络宁注射液可能具有一定的促血管生成作用，其机制可能与促进血管内皮细胞增殖和DNA的合成，抑制细胞凋亡，上调多种促血管生长因子如血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialcellgrowthfactor,VEGF)、血小板衍化生长因子（platelet-derivedgrowthfactor，PDGF）和碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor，bFGF)等的表达，提高组织细胞血红蛋白和羟脯氨酸含量有关。按5:1的配比将黄芪与当归作用于CAM上，在血管新生和血管计数方面，其结果在血管新生及计数方面均显著比其他配比组及生理盐水空白组要好，在促进CAM血管新生方面具有更好的作用。尽管许多方面均已证实中药在体内优化促血管生长因子的作用，其局限性在于仅停留在口服和静脉给药方面，我们在过去的研究中已阐明黄芪微乳载入修饰后胶原和VEGF对CAM血管新生具有相似的促进作用。
　　 【目的】通过将黄芪、脉络宁注射液载入修饰后胶原，观察对促CAM血管新生的疗效，并证明黄芪与脉络宁之间的协同作用，同时探讨黄芪-脉络宁胶原对血管新生的细胞学影响及其可能的机制，为其应用于临床提供理论依据。
　　 【方法】用肝素钠修饰Ⅰ型胶原，将黄芪注射液、脉络宁注射液及二者混合液加于修饰好的胶原上。实验共分为5组，不加任何处理的单纯鸡胚孵化为空白组、将胶原放入鸡胚尿囊膜上为控制组、胶原中载入1mL黄芪注射液为黄芪组、胶原中载入1mL脉络宁注射液为脉络宁组、胶原中载入各0.5mL黄芪注射液及脉络宁注射液为黄芪+脉络宁组，30min后将各组植入鸡胚尿囊膜孵化，7d后取出，观察鸡胚存活情况及尿囊膜血管生长形状，利用格子法计数鸡胚尿囊膜内和各组胶原内不重复的3个视野毛细血管(50×)，采用光度计法测定各组血红蛋白含量，同时取创面中心肉芽组织，做病理CD31免疫组化后随机取3个视野对rhVEGF165阳性细胞数进行计数。应用增殖、迁移、管腔形成实验观察黄芪-脉络宁胶原对大鼠胸主动脉内皮细胞在血管新生各阶段的作用，用WesternB1ot实验检测大鼠胸主动脉内皮细胞VEGF的表达。
　　 【结果】各实验组鸡胚尿囊膜内血管呈轮辐状生长及鸡胚尿囊膜包裹标本率高于空白组与控制组，鸡胚尿囊膜内微血管数、胶原内微血管数、血红蛋白含量、rhVEGF165阳性细胞数均高于控制组，差异有显著性意义(P＜0.01);其中黄芪+脉络宁组又高于黄芪组与脉络宁组，差异有显著性意义(P＜0.05)。黄芪-脉络宁胶原能明显促进大鼠胸主动脉内皮细胞的增殖率，与对照组比较，增加了90.22％(P＜0.01)；迁移率增加了211.43％(P＜0.01)；管腔形成数是对照组的2.46倍(P＜0.01)；同时刺激内皮细胞VEGF蛋白表达增加了63.8％(P＜0.01)。
　　 【结论】黄芪、脉络宁载入胶原后，不仅对鸡胚尿囊膜内血管新生具有促进作用，对刺激血管长入胶原内也有一定的促进作用，两者合用具有协同作用；黄芪-脉络宁胶原能明显促进内皮细胞增殖、迁移、管腔形成，具有显著的促进体外血管新生作用，其机制可能与增加VEGF的表达有关。