羌活膏膏摩治疗木瓜蛋白酶诱导兔膝骨关节炎性滑膜炎的实验研究

摘要

背景:膏摩是以药物制成的膏剂作为介质，在人体体表的一定部位或穴位施行按摩手法，药物助手法以提高疾病的治疗效果的一种推拿学的方法。它将药物和推拿手法有机的结合在一起，达到中药学中相须相使的效果，是中医传统推拿疗法中治疗膝关节骨性关节炎的一种非常有特色的方法。羌活作为一种能够祛风除湿、止痛的中药，用来治疗风寒湿痹、肢节疼痛已经有几千年的历史。以羌活为主药的内服药和外敷药在临床上能够显著地缓解关节滑膜炎症，减轻膝关节骨性关节炎的肿胀和疼痛。但是目前对于其作用机制尚不清楚。所以我们通过提取羌活的主要成分挥发油，制备成羌活膏摩膏，观察其对木瓜蛋白酶诱导兔膝关节骨性关节炎模型中滑膜的炎症因子的变化及病理学的变化来探讨羌活膏摩膏可能的作用机制。
　　目的:观察对木瓜蛋白酶诱导的兔膝关节骨性关节炎模型中膝关节滑膜组织中一氧化氮(NO)，白介素-1（IL-1），金属蛋白酶9(MMP-9)以及病理学的改变，探索羌活膏摩膏对膝关节骨性关节炎急性期滑膜炎的可能作用机制。
　　方法:将40只实验动物按照随机区组设计方法分为5组，空白组8只，造模组8只，推拿组8只，膏摩治疗组8只，敷药组8只。采用木瓜蛋白酶关节腔内注射法进行膝关节骨性关节炎造模。将除空白组外的32只兔子于实验开始第1、4、7天，在兔左膝关节关节腔内注入0.5mL体积分数为2％木瓜蛋白酶水溶液。末次药物注射后第7天时将造模侧膝关节与健侧膝关节对照观察，采用Lequesne MG膝关节评估方法，根据造模侧局部反应、步态、关节肿胀、关节活动来判断造模成功。空白组和造模组不予治疗，推拿组、膏摩组和敷药组在末次药物注射后7天分别予以推拿、膏摩、敷羌活膏摩膏的方法开始治疗。于开始治疗后的第11天处死所有动物，切取髌下脂肪垫处滑膜0.2g剪碎匀浆离心，取上清液，采用硝酸还原酶法和蛋白定量法测定NO，采用ELISA法测定IL-1，采用免疫组化半定量分析的方法测定MMP-9，然后通过病理观察各组实验动物左膝关节滑膜组织炎症、滑膜增生和血管增生情况。
　　结果:在进行Lequesne MG膝关节评估时，治疗前空白组分别与推拿组、模型组、膏摩组、敷药组比较有显著性差异，治疗后推拿组在局部反应、步态、关节活动和关节肿胀改善明显，敷药组在局部反应和步态方面改善明显，膏摩组在局部反应、步态和关节肿胀改善明显;模型组和敷药组NO含量高于推拿组和膏摩组(P＜0.05)，推拿组和膏摩组的NO含量高于空白组(P＜0.05)。模型组和敷药组NO含量差异无统计学意义(P＞0.05)，推拿组和膏摩组NO含量差异无统计学意义(P＞0.05)。模型组、推拿组、膏摩组IL-1的含量均高于空白组(P＜0.05)。敷药组和空白组IL-1的含量差异无统计学意义(P＞0.05)。膏摩组IL-1的含量与推拿组、敷药组、模型组之间的差异无统计学意义(P＞0.05)。病理观察及MMP-9免疫组化半定量分析，推拿组、敷药组、膏摩组和模型组之间的差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　结论:本实验研究发现推拿和膏摩方法可以对兔膝关节骨性关节炎的局部反应、步态、关节活动和关节肿胀有明显改善，同时可以降低兔膝骨关节炎模型滑膜中NO的含量。但是在IL-1和MMP-9的测定方面没有发现推拿、膏摩和敷药方法有对于其指标的降低有统计学意义。说明羌活膏摩膏有一定的治疗效果，但是在实验中还发现敷药组和膏摩组有部分过敏反应，说明羌活膏摩膏本身可能具有致敏作用，没有达到药物与推拿相结合产生相须相使的预期效果。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 理论研究

1 膝关节骨性关节炎的中医病证理论

1．1 膝关节骨性关节炎的中医病名探讨

1．2 膝关节骨性关节炎的中医病因病机

1．3 证型

1．4 中医证型的流行病学研究

1．5 中医对于骨痹的诊疗思路

1．6 中医的治法

2．现代医学对骨性关节炎的研究

2．1 骨关节炎的定义

2．2 骨关节炎病理学

2．3 骨关节炎的发病机制

2．4 骨关节炎的临床表现

2．5 骨关节炎的治疗

3 实验动物模型研究进展

3．1 关节内注射化合物诱发骨关节炎

3．2 骨关节炎制动造模法

3．3 自发性骨关节炎模型

3．4 前交叉韧带横断模型

3．5 半月板切除骨关节炎模型

第二部分 实验研究

1 引言

2 实验对象

2．1 实验设计

2．2 时间及地点

2．3 实验材料

3 实验方法和结果

3．1 随机分组对照实验过程

3．2 实验结果

3．3 实验结论

第三部分 讨论

1．推拿治疗膝关节骨性关节炎的研究现状

1．1 单一推拿手法治疗

1．2 推拿结合针灸治疗

1．3 推拿结合中药外治

1．4 推拿结合物理治疗

1．5 推拿结合运动疗法

2 膝关节骨性关节炎动物模型的选择

3．羌活膏的制备和作用机制

3．1 膏摩膏药物的选择

3．2 羌活膏的制备

3．3 羌活膏摩膏的作用机制

3．4 膏摩对膝关节骨性关节炎滑膜炎作用的机制

3．5 过敏原因的分析

结语

1 本研究结论

2 创新点

3 存在的问题

3．1 未做药物过敏实验

3．2 研究样本量过小

3．3 研究内容比较局限

4 展望

参考文献

附录

攻读硕士学位期间取得的学术成就

致谢