龙柴方对DHBV感染麻鸭模型HBV抑制作用的研究

摘要

本研究从理论文献角度对CHB中西医研究现状角度进行了概括、总结和分析，并通过实验研究建立DHBV感染麻鸭模型，观察龙柴方对动物模型血清HBV载量及病毒复制的影响变化，探讨其抗DHBV病毒的抑制作用，为临床疗效提供科学依据。
　　第一部分:理论研究从现代医学对HBV生物特性，CHB的病原学、流行病学、诊断治疗、药物评价等研究概况，龙柴方对CHB疗效作用的理论机制方面进行了探讨。研究归纳认为，现代医学对HBV感染传播途径及机制清楚，核苷类似物(NAs)及干扰素(IFN)抗HBV客观有效，但持久耐药、毒副作用及停药后反弹甚至加重等成为人们关注的医学问题。中医药认为CHB的发病与湿、热、郁、瘀、毒等病理因素相关，主要采用辨证分型论治、经验效方、中西医结合等方法治疗，取得了可喜的成绩。龙柴方对CHB客观有效，具有一定的抗HBV作用，其疗效作用是建立在中医传统功效理论基础之上，并与其组方药物的中药药理机制相关。
　　第二部分:建立HBV感染麻鸭模型，通过龙柴方高、中、低不同给药剂量干预10天，与阳性药物拉米夫定(3TC)和病毒空白组照，观察龙柴方对HBV感染鸭血清中DHBV DNA的抑制作用。结果表明，①各药物干预与病毒对照组比较在第D0、D10天DHBV DNA表达呈明显下降(P＜0.01);②拉米夫定前期对DHBV DNA的抑制作用优于龙柴方各组(P＜0.05和0.01)，但停药后出现明显抑制下降，DHBV反跳，而龙柴方各组呈现持续的抑制作用;③龙柴方高、中、低剂量组间比较，以低剂量组抑制效果最佳，抑制作用持续;④龙柴方高、中、低剂量各组对DHBV的抑制作用未呈现明显的量效关系。分析认为，龙柴方对DHBV具有抑制作用，虽短期内其抗HBV效应较拉米夫定为低，但龙柴方显示出持久的抗HBV作用;至于中、高剂量未显示出优于低剂量组的抗HBV活性作用，考虑可能与组方药物中大剂量的龙葵、白花舌蛇草等的细胞毒作用相关，以致细胞免疫功能低下，HBV增殖活跃。本研究提示，临床治疗CHB，在使用NAs和IFN的同时，配合使用常规剂量的龙柴方将可能提高抗HBV效应，实现持久的免疫应答，提高疗效;同时避免使用大剂量方剂。本研究为龙柴方具有的抗HBV作用提供实验依据，亦为中医效方对CHB的疗效作用提供科学证据。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 理论研究

一、现代医学对CHB的相关理论概述

1．HBV致病的生物学特性及新概念

2．CHB流行病学的新数据

3．CHB诊治现状简述

4．对抗HBV药物的评价

二、中医学对CHB的相关研究概括

1．中医对CHB相类病症认识

2．中医对CHB的病因病机认识

3．治则框架结构的现状

4．部分名医学术思想及经验摘要

三、龙柴方对CHB疗效作用的理论分析

1．龙柴方方证相应理论的建构

2．龙柴方组方药物解释

3．龙柴方组方药物的药理作用概述

4．龙柴方相关研究撷要

第二部分 实验研究

一、实验目的

二、实验材料

1．实验动物

2．病毒株

3．受试药物

4．实验药物供试液配制

5．实验试剂

6．一般试剂配制

7．DIG标记试剂盒(Roche公司)配制

8．仪器与耗材

三．实验方法

1．DHBV探针的制备(由复旦大学药学院制备完成)

2．DHBV的地高辛(DIG)标记

3．标记探针的浓度鉴定

4．鸭乙型肝炎的病毒感染

5．动物分组与药物干预

6．血清DHBV DNA定量检测(斑点杂交法)

7．病毒抑制率计算

8．统计学及数据处理方法

四．实验结果

1．各组鸭血清中DHBV DNA表达的情况

2、各组鸭血清中DHBV DNA斑点灰度值比较

3．龙柴方对血清中DHBV DNA复制的抑制率的变化

五、讨论

1．DHBV感染动物模型的建立

2．龙柴方对DHBV DNA表达抑制作用的分析

3．龙柴方对DHBV DNA复制的抑制率的讨论

4．龙柴方对DHBV DNA抑制作用的量效关系分析

结语

参考文献

附录

综述 中医药治疗乙型病毒性肝炎的进展概述

攻读硕士学位期间取得的学术成果

致谢