基于TLR9/ERK信号通路探讨益气祛风、宣痹化饮方治疗过敏性鼻炎-哮喘综合征的作用机制

摘要

过敏性鼻炎—哮喘综合征是一组兼具有过敏性鼻炎及支气管哮喘特征的临床常见症候群，病情常反复发作，迁延不愈，目前西医学尚缺乏有效的治疗手段，仅能对症治疗，而中医学立足于整体观念，从辨证论治的角度出发，临床常获佳效。但本病的发病机制复杂，中医药对本病的干预的靶点尚未完全清晰，动物实验缺乏公认的造模方法，故中医药对于本病发挥疗效的作用机理也难以阐明。吾师史锁芳教授潜心研究本病的发病机制，并根据多年的临床经验，创制出独特治法“益气祛风、宣痹化饮法”和经验方—益气祛风、宣痹化饮方，临床用治本病疗效满意。本团队在前期的研究中已经发现该方可以阻断过敏性鼻炎-哮喘综合征相关信号通路，限制多种炎症介质的产生，为了进一步探索本方治疗本病的相关机理，特进行本研究。
　　本论文由三大部分组成:首先是理论部分的复习，主要为关于CARAS的中西医认识，对于本经验方的理法方药组成及药理学上的研究进展及待研究通路的中西医认识;第二部分是实验研究:其中实验一为探索本病豚鼠模型的建立，主要包括相关文献的介绍、造模的具体思路及步骤、各组豚鼠血清炎性介质IL-5、IL-13之间的比较以及豚鼠鼻粘膜和肺组织病理形态学的变化及对比。实验二为经验方（益气祛风、宣痹化饮方）对豚鼠CARAS模型抗炎平喘的实验观察。主要内容为:(1)各组之间血清IL-5、IL-13水平的比较;(2)各组之间肺组织匀浆液IL-5、IL-13水平的比较;(3)各组之间肺组织匀浆液TLR9、ERK1/2表达水平;(4)各组之间鼻粘膜及肺组织病理改变情况。第三部分为讨论:分为豚鼠CARAS模型制备的思考与评价，益气祛风、宣痹化饮方的疗效评估及本实验存在的问题和当下研究的前景展望。现将论文的大致内容简概如下:
　　目的:本研究是在临床取得良好效果的基础上，探索益气祛风、宣痹化饮方调节TLR9/ ERK信号通路治疗过敏性鼻炎-哮喘综合征可能的作用机制，为中医药治疗哮喘提供实验依据。
　　方法:(1)造模:参考相关文献，采用过敏性鼻炎联合支气管哮喘的造模方法，豚鼠腹腔注射卵蛋白及氢氧化铝凝胶全身致敏，后以卵蛋白雾化激发制备支气管哮喘模型，再用卵清蛋白滴鼻造成上呼吸道炎症，通过血清炎症因子治标及鼻粘膜与肺组织病理改变评估造模结果;(2)干预:选取60只豚鼠。分为中药低、中、高剂量组、模型组、西药组、空白组。每组各10只。造模方法同前。空白组及模型组:采用普通盐水灌胃;中药组:按照分组不同以经验方汤剂灌胃。西药组:地塞米松片。1次/d，连续7天。后予以检测豚鼠血清中IL-5、IL-13变化情况、肺组织中IL-5、IL-13、TLR9、ERK情况及各组豚鼠鼻粘膜、肺组织病理染色。
　　结果:此种造模方法成功建立了豚鼠气道炎症模型。豚鼠出现了挠鼻、打喷嚏、咳嗽、气喘等CARAS临床类似特征。益气祛风、宣痹化饮方能显著降低豚鼠血清及肺组织当中的炎症因子水平，下调ERK1/2的表达水平，减轻鼻粘膜及肺组织的炎症细胞浸润，其疗效或可与地塞米松相当。
　　结论:1、本造模方法成功复制出了豚鼠CARAS模型，其结果有一定的研究意义;2、通过动物实验证实了导师经验方（益气祛风、宣痹化饮方）具有良好的抗炎平喘的效果，且治疗作用有一定的量效关系;3、研究表明:本方可以通过阻断ERK信号通路从而减轻气道炎症，减少炎症细胞的浸润，从而达到对本病治疗的效果。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 理论研究

1．中西医对于CARAS的认识

1．1 西医学对CARAS的认识

1．2 中医学对CARAS的认识

2．对益气祛风，宣痹化饮方的认识

2．1 益气祛风，宣痹化饮方的组方思想

2．2 益气祛风，宣痹化饮方的现代研究进展

3．TLR9／ERK信号通路的认识

3．1 现代医学对ERK的认识

3．2 ERK与哮喘的联系

3．3 中医药对于ERK信号通路的影响

第二部分 实验研究

实验一：豚鼠CARAS模型的建立

1．材料与方法

2．结果

3．结果分析

实验二：益气祛风、宣痹化饮方对CARAS豚鼠模型各项炎症指标及TLR9、ERK1／2水平作用的实验研究

1．实验材料

2．方法

3．结果

第三部分 讨论

1．豚鼠CARAS模型制备的思考与评价

2．益气祛风、宣痹化饮方的疗效评估

2．1 益气祛风、宣痹化饮方对豚鼠CARAS IL-5、IL-13水平的影响

2．2 益气祛风、宣痹化饮方对豚鼠CARAS TLR9、ERK1／2水平的影响

3．问题与展望

参考文献

攻读硕士学位学术成果

致谢