普拉梭菌联合溃克灵对小鼠结肠炎调节性T细胞及相关因子的影响

摘要

背景:普拉梭菌(Faecalibacterium prausnitzii, F.prausnitzii)具有促进IBD模型鼠调节性T细(Treg)分化的作用，而溃克灵(KKL)也参与了IBD时Treg细胞的分化调节。
　　目的:探讨F.prausnitzii联合KKL对IBD模型鼠Treg细胞协同作用机制。
　　方法:将C57BL/6J小鼠共50只，随机分为5组:正常组，炎症对照组，F.prausnitzii干预结肠炎组，KKL干预结肠炎组，F.prausnitzii联合KKL干预结肠炎组，每组10只。正常组自由饮水，其余各组均将2.5％ DSS溶液，自由饮用以制备结肠炎模型，干预组小鼠分别予以F.prausnitzii、 KKL、F.prausnitzii联合KKL灌胃。观察小鼠一般状况和HE染色评估其结肠组织病理程度;以流式细胞术检测各组小鼠外周血、脾脏、肠系膜淋巴结(MLN)中Treg细胞比例;ELISA法检测外周血TGF-β1、IL-10水平;Real Time PCR检测结肠组织中Foxp3、TGF-β1、IL-10mRNA的表达。
　　结果:F.prausnitzii联合KKL干预结肠炎组小鼠的结肠病理损伤轻于炎症对照组以及F.prausnitzii干预结肠炎组(p＜0.05)，其结肠组织学评分较炎症对照组和F.prausnitzii干预结肠炎组均下降(p＜0.05)，但与KKL干预结肠炎组之间无差异(p＞0.05)。F.prausnitzii联合KKL干预结肠炎组其外周血，脾脏及淋巴结中Treg比例与炎症对照组相比均明显上升(p＜0.05)，与F.prausnitzii干预结肠炎组、KKL干预结肠炎组相比，脾脏中Treg比例明显上升(p＜0.05），但在外周血及淋巴结中无差异(p＞0.05)。较炎性对照组相比，F.prausnitzii联合KKL干预结肠炎组小鼠血清TGF-β1、IL-10表达水平明显升高(p＜0.05)，其PCR结果显示Foxp3、TGF-β1明显升高(p＜0.05)，而IL-10表达与炎症对照组无差异(p＞0.05)。与F.prausnitzii干预结肠炎组、KKL干预结肠炎组相比，F.prausnitzii联合KKL干预结肠炎组小鼠血清TGF-β1升高(p＜0.05)，其PCR结果显示Foxp3、TGF-β1升高p＜0.05)，但IL-10表达无差异(p＞0.05)。
　　结论:F.prausnitzii联合KKL影响Treg细胞分化调控，能上调Treg细胞比例，促进Treg细胞分泌抗炎因子TGF-β1、IL-10，促进结肠组织中Foxp3mRNA和TGF-β1mRNA的表达。F.prausnitzii联合KKL治疗小鼠结肠炎疗效优于F.prausnitzii干预结肠炎组、KKL干预结肠炎组，可能与两者联合对Treg细胞功能的发挥及细胞因子分泌有协同作用有关。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 理论研究

1 Treg细胞在炎症性肠病中的研究进展

1．1 Treg细胞的概述

1．2 Treg细胞在肠道粘膜的作用机制

1．3 Treg细胞与肠道菌群

1．4 Treg细胞与IBD

2 中医对炎症性肠病的免疫调节研究

2．1 中医药对淋巴细胞的调节

2．2 中医药对细胞因子的调节

2．3 中医药对免疫复合物的调节

2．4 中医药对黏附分子的调节

第二部分 实验部分

1 实验材料

1．1 研究对象

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器和设备

2 实验方法

2．1 F.prausnitzii菌培养与制备

2．2 药物制备

2．3 动物模型制备、分组、标本处理

2．4 组织学评分

2．5 小鼠脾脏、外周血及肠系膜淋巴结中淋巴细胞的分离

2．6 流式检测脾脏、外周血淋巴细胞及肠系膜淋巴结中Treg细胞比例

2．7 ELISA法检测外周血清中TGF-β1、IL-10水平

2．8 PCR检测结肠组织中Foxp3、TGF-β1、IL-10mRNA的表达

2．9 统计学分析

3 结果

3．1 小鼠一般情况及结肠组织学表现

3．2 各组小鼠外周血、脾脏、肠系膜淋巴结中Treg细胞比例

3．3 各组小鼠血清中TGF-β1、IL-10的水平比较

3．4 各组结肠组织中Foxp3 mRNA、TGF-β1mRNA、IL-10mRNA的表达量

4 讨论

结论

参考文献

附录

攻读硕士期间取得的学术成果

致谢