益肾活血股密保方治疗早中期股骨头坏死的临床研究及其含药血清对体外破骨细胞影响的实验研究

摘要

目的:1.通过收集临床病例进行随机对照研究，观察益肾活血股密保中药方治疗早中期股骨头坏死(Osteonecrosis of the femoral head，ONFH)的临床疗效。
　　2.通过实验研究，检测股密保含药血清的毒性;利用体外诱导骨髓单核细胞的方式获取足够数量、性状稳定的满足实验要求的破骨细胞;观测股密保含药血清对骨髓单核细胞诱导分化为破骨细胞的影响;观测股密保含药血清对破骨细胞骨吸收功能的影响。
　　方法:1.按照西医纳入标准及排除标准的范围，对2016年1月至2017年2月在苏州市中医医院骨伤科门诊进行治疗并完成随访的ONFH患者，共43例（51髋），采用随机法将病人分为两组，对照组口服阿仑瞵酸钠（福善美）70mgqw8周;治疗组口服股密保方，4周为一个疗程，共2个疗程。治疗前后采用Harris评分、疼痛直观模拟量表（VAS表）和影像学检查结果等进行详细的记录，最后统计数据进行分析。
　　2.用体外诱导骨髓单核细胞的方式，在培养及传代完成的骨髓单核细胞中加入含25ng/ml的M-CSF、100ng/ml的RANKL、1％PS、5％FBS的α-MEN溶液进行破骨细胞的诱导;并进行破骨细胞的观察及鉴定;采用CCK-8法检测含药血清毒性;骨髓单核细胞诱导后经多聚甲醛固定后行TRAP染色计算其中阳性细胞数目;对骨片进行甲苯胺蓝染色，然后观察骨片上面骨吸收陷窝形成的个数及面积;最后进行扫描电镜观察。
　　结果:
　　1、治疗后两组患者的Harris评分及VAS评分均较治疗前有明显改善，(p＜0.05)但两组临床疗效之间无显著统计学差异。
　　2、两组比较治疗前后坏死指数评分差值研究显示，在缓解股骨头坏死进程方面，治疗组优于对照组。
　　3、两组比较治疗前后疗效结果显示，在缓解骨髓水肿及关节积液方面，股密保有一定疗效，与阿仑膦酸钠疗效相似。
　　4.通过骨髓单核细胞体外诱导的方式，可以获取满足实验要求的破骨细胞。
　　5.股密保高、中、低浓度含药血清组与生理盐水对照组相比，在12h，24h，3d及5d四个观察期内毒性差异均无统计学意义(P＞0.05)。
　　6.通过观察TRAP阳性细胞数，在抑制骨髓单核细胞分化为破骨细胞的作用方面，股密保高、中、低浓度含药血清组与生理盐水对照组相比有显著差异(P＜0.05)，但股密保各浓度组之间疗效无显著差异(P＞0.05)。
　　7.在限制骨吸收陷窝计数作用方面，通过数据分析，高浓度股密保含药血清组与生理盐水对照组疗效之间存在显著性差异(P＜0.05);其余各组之间无显著差异。
　　8.在限制骨吸收陷窝面积作用方面，通过数据分析，高浓度股密保含药血清组与生理盐水对照组疗效之间存在显著性差异(P＜0.05);低浓度及中浓度含药血清组与高浓度含药血清组疗效之间存在显著差异(P＜0.05);其余各组之间无显著差异。
　　结论:
　　1.对于早中期股骨头坏死患者，股密保方有一定的疗效，可缓解疼痛，改善髋关节功能，减轻骨髓水肿及关节积液，延缓股骨头坏死塌陷进程，疗效与阿仑膦酸钠相似。
　　2.股密保含药血清没有毒性，可以抑制骨髓单核细胞诱导分化为破骨细胞;可以抑制破骨细胞的骨吸收功能。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 理论研究

1．ONFH的中医理论

1．1 病因辨证

1．2 病机辩证

1．3 中医研究进展

2．现代医学的理论研究

2．1 定义

2．2 股骨头坏死的分期

2．3 股骨头坏死的病理研究

2．4 股骨头坏死的发病机制

3．ONFH的西医治疗

3．1 非手术治疗

3．2 手术治疗

4．ONFH的中医治疗

5．股密保方的基础研究

5．1 组方来源

5．2 组方分析

5．3 制首乌临床用药安全分析

第二部分 临床研究

1．研究目的

2．临床资料

2．1 研究对象

2．2 病例选择标准

3．研究方法

3．1 随机方法

3．2 治疗方法

3．3 观察内容

3．4 统计分析

4．研究结果

4．1 一般资料

4．2 治疗组与对照组治疗的疗效观察

5．讨论

5．1 结论与分析

5．2 治疗组与对照组疗效比较

5．3 股密保方治疗早中期股骨头坏死作用机理分析

5．4 研究不足及未来展望

6．典型病例

第三部分 实验研究

1．实验材料

1．1 实验动物

1．2 中药组成及来源

1．3 实验仪器

1．4 实验试剂

2．实验方法

2．1 含药血清的制备

2．2 实验试剂的配制

2．3 骨片的制备与处理

2．4 骨髓单核细胞的培养及传代

2．5 破骨细胞的诱导分化

2．6 破骨细胞的鉴定

2．7 CCK-8法检测含药血清毒性实验

2．8 TRAP阳性细胞数实验

2．9 骨吸收陷窝的实验

实验技术路线图

3．实验结果

3．1 含药血清的毒性试验结果

3．2 破骨细胞的形态学观察

3．3 破骨细胞的TRAP染色鉴定

3．4 股密保含药血清对骨髓单核细胞诱导分化为破骨细胞的结果

3．5 股密保含药血清对破骨细胞骨吸收功能的观察

4．讨论

4．1 破骨前体细胞与破骨细胞关系

4．2 破骨细胞与股骨头坏死塌陷

4．3 中医药对破骨细胞的研究进展

4．4 股密保含药血清的毒性研究

4．5 股密保含药血清对骨髓单核细胞诱导分化作用的影响

4．6 股密保含药血清对破骨细胞吸收功能的影响

5．结论

6．研究不足与未来展望

参考文献

附录

攻读硕士学位期问取得的学术成果

致谢