猪链球菌2型斑马鱼模型的应用和剑尾鱼MHC-DXB基因Exon2片段的原核表达

摘要

选用1005尾AB系斑马鱼(Danio rerio)以检测猪链球菌2型(Streptococcus suis type2，SS2)不同分离株的致病力。检测对象为8株基因型均为mrp+eF+、对猪有致病力的SS2菌株。结果斑马鱼接种细菌12h后呈败血症病变，96h内的半数致死量(LD<,50>)在6.92×10<'3>至5.01×10<'4>之间。上述斑马鱼均可从体内重新分离到接种菌。同时检测一株基因型为mrp-eF-、对猪无致病力的SS2菌株，斑马鱼接种后96h内不表现任何病变，亦不出现死亡，对斑马鱼的LD<,50>>10<'6>cfu。SS2有毒力株和无毒力株对斑马鱼的LD<'50>差异极显著。以斑马鱼评价SS2分离株的主动免疫及被动免疫效果。AB系斑马鱼50尾/组，27℃恒温饲养。以灭活江苏分离株HA9801、灭活四川分离株ZY05719、溶菌酶释放蛋白(MRP)重组蛋白、pET空载体融合蛋白、猪抗HA9801高免血清、猪阴性血清及生理盐水腹腔注射各1组斑马鱼。14d后进行二免。29d后以50LD<,50>。剂量，腹腔内接种HA9801。另取灭活HA9801、灭活ZY057l9同法免疫斑马鱼各1组，接种50LD<,50>剂量ZY05719。接种后均观察7d，计算每组相对保护率(RSP)。结果对照组全数死亡，接种HA9801后注射HA9801全菌苗、ZY05719全菌苗、MRP重组蛋白、猪高免血清、猪阴性血清组的RSP(％)分别为78、72、61、72、8；接种ZY05719后，HA9801全菌苗、ZY05719全菌苗免疫组的RSP均为86％。显示两种全菌灭活苗对HA9801、ZY05719的攻击均有较好的保护效果，MRP重组蛋白及SS2高免血清对斑马鱼有一定保护作用。斑马鱼可用于SS2疫苗的筛选和抗SS2血清效价的检测。斑马鱼适宜作为研究猪链球菌2型菌株感染的动物模型。 为研究鱼类主要组织相容性复合体(MHC)II类分子功能，本研究亚克隆了剑尾鱼RR-B品系MHC-DXB基因的exon2基因，构建了重组质粒pET-exon2，进行了原核可溶性表达，利用抗His尾的多抗进行免疫印迹，鉴定表达产物为目的重组蛋白。

目录

文摘

英文文摘

原创性声明及学位论文版权使用授权书

第一部分文献综述：第一章感染模式动物斑马鱼的应用

第一部分文献综述：第二章鱼类MHC分子的结构与功能综述

第二部分实验研究：第三章用斑马鱼检测猪链球菌2型的致病力

第二部分实验研究：第四章斑马鱼抗猪链球菌2型感染的免疫保护

第二部分实验研究：第五章剑尾鱼MHCⅡ类DXB基因exon2片段的原核表达

全文总结

致谢