南、北美大豆猝死综合症病菌PCR检测方法的研究

摘要

对南美大豆猝死综合症病菌Fusarium tucumaniae和北美大豆猝死综合症病菌Fusarium viRguliforme rDNA基因间间隔区(IGS)进行分析后设计筛选出三对特异性引物FT1/FT6、FT1/FT9和FV1/FV1A。利用FT1/FT6、FT1/FT9两对特异性引物进行PCR反应，南美大豆猝死综合症病菌能分别扩增出250bp、656bp左右的特异性PCR产物，利用特异性引物FV1/FV1A进行PCR反应，北美大豆猝死综合症病菌能扩增出228bp左右的特异性PCR产物，使用的菌株包括5株Fusarium virguliforme,3株只tucumaMac，1椿Fusaritium brasiliense,1株 Fusarium cuneirostrum．1椿 Fusariumphaseoli，6株Phytophthora sojae和21株从大豆或土壤中分离的Fusarium sp。利用Alu I和Sac I内切酶对特异性引物FT1/FT6形成的PCR产物进行酶切试验，特异性PCR产物分别被切成232bp、18bp和158bp、92bp两段产物；用AluI内切酶对特异性引物FV1/FV1A形成的PCR产物进行酶切试验，特异性PCR产物分别被切成144bp、84bp两段产物，均与设计酶切序列相吻合。灵敏性试验表明：利用特异性引物FT1/FT6、FV1/FV1A检测到南、北美大豆猝死综合症病菌DNA的最低含量均为lpg/ul。土壤检测试验表明，利用FT1/FT6特异性引物和另一对特异性引物FT1/FT9进行套式PCR检测，能检测到每克土壤中接种量为100个大分生孢子的南美大豆猝死综合症病菌。利用特异性引物FV1/FV1A能直接检测到每克土壤中接种量为10<'3>个大分生孢子的北美大豆猝死综合症病菌。

目录

文摘

英文文摘

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引 言

上篇文献综述

第一章SDS病菌的危害情况

第二章SDS病菌的分类演变与现状

第三章SDS病菌的形态特征

第四章SDS病菌的检测研究状况

参考文献

下篇实验研究

第五章南美大豆猝死综合症病菌PCR检测技术研究

第六章北美大豆猝死综合症病菌的PCR鉴定、检测技术的研究

参考文献

附件

致谢