萝卜游离小孢子胚状体诱导与植株再生研究

摘要

为了建立高效的萝卜游离小孢子培养体系，加速育种材料纯化，以19个材料为试材，采用游离小孢子培养方法，研究影响小孢子胚诱导因素，促进小孢子植株再生的方法，探讨了小孢子植株倍性鉴定方法，对获得的再生植株的性状进行了鉴定，获得了下列试验结果： 1、不同基因型的萝卜试材间的小孢子胚状体发生能力有很大的差异，19个萝卜品种中有13个品种产生了胚状体，其余6个品种没有被诱导成功。小孢子胚状体诱导率最高的品种‘Nau-11tcx-06’出胚率达到10胚/蕾。 2、花蕾发育时期是小孢子诱导出胚状体的关键因素，供试品种不同适宜培养的花蕾长度也不相同，“花瓣/花药”长度之比为6/7～8/7时，小孢子的发育时期处于单核靠边期与双核早期，在形态上观察选择圆形小孢子占绝大多数的花蕾进行游离小孢子培养较合适。 3、活性炭对小孢子的发育有很大的影响，提高胚状体的诱导率，并且提高子叶型胚状体的比例，低浓度的活性炭对小孢子发育的诱导起促进作用，高浓度反而起到一定的抑制作用。 4、外源激素对小孢子发生及发育有一定的影响，低浓度的6-BA促进难成胚的基因型细胞启动分裂，高浓度的6-BA对小孢子胚状体的产生有抑制作用，并使小孢子胚状体向畸形化发展。 5、将花蕾保存在4℃低温环境中预处理，胚状体统计结果表明，胚状体诱导率未有显著变化，但是可以暂时保存材料，并不降低培养效果。经过5～6天的保存，发现诱导率明显降低，经染色检测花粉活力明显不足。 6、游离小孢子33℃高温预处理，可以改变小孢子发育方向，使其由配子体发育途径转向孢子体发育途径，并使小孢子维持较高的活细胞频率，促进细胞分裂和胚状体发生。 7、在对不同花期取样诱导的研究中发现，不同的基因型适宜培养的花期不一致，但总体上盛花期花蕾样品成胚率高。 8、胚状体成苗率与胚胎发育程度密切相关，在一定范围内胚状体越大越容易成苗。小孢子植株主要来源于发育健康的胚状体，畸形胚状体很难在固体培养基上生长发育。 9、试管苗生根培养基经过比较，发现以MS+NAA0.2mg·L<'-1>+3％蔗糖+0.7％琼脂最为适宜，生长的根系粗壮整齐，如果一次生根不成功，还需要二次生根。在温度、湿度和光照条件适宜的情况下，小孢子植株的移栽成活率可以达到90％-100％。 10、不同基因型材料的小孢子植株群体中单倍体、二倍体、四倍体和嵌合体所占的比例不同，不同品种间植株的自然加倍率有显著的差异。 11、小孢子植株倍性鉴定的最可靠方法是细胞学方法，可以通过根尖细胞压片或花粉母细胞压片的方法进行植株倍性鉴定，流式细胞测定方法是最为迅速的测定方法。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表

声明

第一章文献综述

1我国的萝卜育种和生产

2萝卜组织培养研究

3植物单倍体育种

4花药培养

5游离小孢子培养

5.1雄核发育途径

5.2离体花粉孢子体的发育途径

5.3小孢子培养简介

6花药培养和小孢子培养比较

7影响游离小孢子培养胚状体发生的因素

7.1基因型

7.2小孢子所处发育时期

7.3供体植株的生长状况

7.4热激处理

7.5培养基成分

8小孢子培养的发展潜力及应用前景

9本课题研究的目的意义

第二章萝卜小孢子诱导成胚状体和成苗研究

1试验材料、设备和方法

1.1材料和设备

1.2试验方法

2影响小孢子胚状体诱导因素研究

3、结果与分析

3.1不同培养基筛选

3.2基因型对胚状体诱导影响

3.3萝卜游离小孢子活力的研究

3.4花蕾大小与小孢子发育时期的关系

3.5取材时期对小孢子胚状体诱导的影响

3.6低温预处理对小孢子胚状体诱导的影响

3.7高温预处理对小孢子胚诱导率的影响

3.8活性炭对小孢子胚状体形成及发育的影响

3.9 6-BA对小孢子胚状体诱导的影响

4.小孢子在离体培养过程中的发育观察

5讨论

第三章萝卜小孢子试管苗的继代培养和生根移栽

1试验材料

2试验方法

2.1小孢子试管苗的继代培养

2.2小孢子植株的移栽

3结果与分析

3.1继代基本培养基的筛选

3.2 6-BA和NAA对继代增殖的影响

3.3 NAA浓度对生根的影响

3.4小孢子植株的移栽、驯化

4讨论

第四章萝卜游离小孢子植株倍性鉴定方法研究

1试验材料

2试验方法

3结果与分析

3.1不同倍性小孢子植株的形态学特征

3.2根尖染色体记数结果

3.3自交结实情况

3.4流式细胞仪测定

4.讨论

结论

参考文献

附录及图板

发表论文情况

致谢