小鼠附植前胚胎微环境对人宫颈癌细胞（HeLa）的重编程作用

摘要

过去认为恶性肿瘤细胞可以入侵各种组织并且注入到成年动物体内会产生肿瘤。但是最近研究证明注入早期囊胚后癌细胞的恶性表型可以被逆转为正常状态。这说明癌细胞的恶性表型并非其固有的特征，更可能与其周围的环境有关，从微环境的角度来寻找抑制肿瘤的方法日益成为肿瘤研究的焦点。本试验建立聚合胚、注射胚两种体外发育模型，并结合实时荧光定量Real-time PCR技术来研究附植前小鼠胚胎微环境对人宫颈癌HeLa细胞的重编程作用。研究结果如下： 1、聚合胚的制作收集昆明白小鼠的8-细胞胚胎和桑椹胚，消化透明带后与50-100个HeLa细胞置于同一凹窝中，培养30h-50h。聚合30h后大多数囊胚已经发育到桑椹胚后期或早期囊胚，囊胚率为70.3％，40h后囊胚率为78.9％，50h后囊胚率为84.6％。 2、注射胚的制作本试验选取充分扩张的小鼠囊胚，共注射97枚(每个胚胎注射15-20个HeLa细胞)，经24h的培养重新出现膨大囊胚腔的有73枚，囊胚孵化率为75.3％。 3、Real-time PCR检测嵌合体中人宫颈癌易感基因mRNA表达根据人和小鼠β-actin基因cDNA序列的差别，利用Oligo 6.0设计人特异β-actin基因引物。经检测发现人β-actin在聚合胚中有表达，说明HeLa细胞可以与早期鼠胚发生聚合。结果表明，在聚合胚和注射胚中，HeLa细胞特异表达的c-myc基因、c-erbB2基因的mRNA产物都显著降低(P<0.01)。成年人宫颈癌细胞可以与附植前鼠胚微环境中因子产生应答。这些环境因子可以为人宫颈癌细胞提供生存空间并使其发生细胞核重编程。本试验证明附植前早期胚胎微环境可以逆转肿瘤的恶性表型，为认识肿瘤的本质和临床治疗提供新的思路。

目录

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引言

第一章文献综述

1细胞核重编程

1.1核移植

1.2细胞移植

1.3细胞融合

1.4细胞提取物

1.5体外定向诱导模型的建立

2嵌合体

2.1嵌合体动物研究进展

2.2聚合法

2.3囊胚注射法

2.4聚合法和注射法的比较

2.5嵌合体的类型

第二章试验研究

1实验材料

1.1实验动物

1.2其它实验材料

1.3主要实验仪器及器械

1.4主要试剂

2实验方法

2.1实验方案的总体设计

2.2 HeLa细胞培养

2.3早期胚胎的收集

2.4聚合法生产嵌合胚

2.5囊胚注射法生产嵌合胚

2.6嵌合胚癌基因mRNA相对表达量检测

2.7数据分析

3结果

3.1人宫颈癌HeLa细胞的培养

3.2聚合法生产嵌合胚

3.3囊胚注射法生产嵌合胚

3.4 HeLa细胞癌基因mRNA表达变化

4讨论

4.1聚合胚的制作

4.2注射胚的制作

4.3 HeLa细胞可以与早期鼠胚聚合并在鼠胚中生存

4.4 HeLa细胞在胚胎微环境中的重编程

参考文献

附录

致谢