上海地区猪戊型肝炎流行病学调查和基因型分析

摘要

戊型肝炎( Hepatitis E，HE)属于人畜共患病，是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus，HEV)引起，该病对人类健康具有很大的危害.HEV在动物宿主中以猪的感染率最高，病毒载量最大，而且从中分离到的病毒和人源毒株也有较高的同源性.因此，摸清猪群中该病的存在状况，对防控人戊型肝炎的发生具有重要的公共卫生学意义。 为了能够准确的了解上海地区戊型肝炎在猪群中的流行情况，从上海市10个辖区的40个猪场中采集918份粪便样品，其中444份为首次采集，474份为追踪调查采集。通过nes ted-PCR的方法，扩增HEV ORF2的部分片断，通过测序和系统进化分析来研究病毒的存在状况。实验结果表明，918份份样品中的220份样品为HEVRNA阳性，阳性率24％。全过程分析显示各个猪场阳性率在0.0％-75％之间，在36号猪场中同时发现基因3型和基因4型存在，并进行连续追踪调查，结果显示该猪场基因4型在感染中占主导优势.选择部分阳性样品PCR产物，扩增的片断克隆T载体，进行测序。系统进化分析表明，基因4型HEV共有28株，和上海地区从人体内分离到的两株戊肝病毒有很高的同源性。基因3型HEV共有14株，在进化树中，这些病毒株形成一个新的分支，但是和一株日本离株较高的同源性.这说明基因3型在上海分布已经较为广泛，但在以前的研究显示，中国境内猪群中只存在基因4型，因而其来源还需进一步研究。 用北京万泰生物药业有限公司提供的动物用HEV总抗体检测试剂盒，采用双抗原夹心法，检测来自上海某猪场的4周龄、8周龄、16周龄和经常母猪血清样品118份，以了解该猪场HEV抗体的存在情况.同时用RT-nPCRA方法检测血清中HEV RNA.结果显示：抗体总阳性率为90.7％(107/118)，其中4周龄、8周龄、16周龄和经常母猪抗体阳性率分别为：85.7％(30/35)、88％(32/35)、94％(33/35)、92.3％(12/13)。血清中HEV RNA阳性率为10.2％(12/118).结果表明该猪场HEV抗体阳性率高，而血清中HEV RNA阳性率较低，并且在较高抗体水平血清中可以检测出HEV RNA阳性。 为了进一步了解，HEV不同基因型是否存在混合感染，参照中国流行基因型，设计两套型特异性引物进行扩增，基因4型目的片段为440bp，位于ORF1和ORF2结合处，基因3型目的片段为ORF2内的164bp，发现同一个体内同时存在基因4型和基因3型HEV.其中4型分离株SW-CSH4与中国分离株T21同源性高达94.5％，而与其他基因型HEV序列比较同源性均在81％以下，属于4a亚型。基因3型分离株SW-CSH3与美国分离株US2同源性高达95.7％，与其他基因3型参考序列同源性均在85％以上，属于3a亚型。

目录

文摘

英文文摘

前言

论文说明：中英文缩略词表

声明

文献综述 第一章戊型肝炎病毒研究进展

试验研究 第二章上海地区猪戊型肝炎流行病学调查

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

试验研究 第三章猪戊型肝炎病毒抗体和RNA相关性研究

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

试验研究 第四章同一个体感染不同基因型的鉴定

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

全文总结

附录 论文中引用的HEV毒株情况一览表

致谢