猪瘟疫苗经粘膜途径接种动物免疫效果分析

摘要

猪瘟病毒是通过粘膜一消化道和呼吸道途径感染动物体，因此如果通过局部粘膜接种疫苗，则可利用抗原与粘膜受体结合的占位作用，有效阻断野毒经粘膜途径感染，达到事半功倍的免疫预防效果。本研究以现有猪瘟疫苗为基础，通过与粘膜佐剂配合，探讨猪瘟疫苗经粘膜途径免疫接种的可行性。
　　 本研究通过重组菌株发酵，获得了大肠杆菌热敏性肠毒素突变体蛋白LTKG、LTRG。利用亲和层析法纯化重组蛋白，经BCA方法定量，蛋白浓度分别为：750μg/ml和660μg/ml。
　　 猪瘟脾淋巴苗分别与LTKG、LTRG蛋白佐剂混合，采用滴鼻、灌胃/口服、肌注三种途径免疫小鼠，间隔10-15天进行二免、三免。每次免疫后，采血，收集鼻洗液和粪便。经间接ELISA检测血清抗体IgG及局部粘膜抗体IgA。结果显示，三免前滴鼻组和灌胃组之间IgG水平相当，无显著差异（P>0.05），但都低于肌注组；三免后，LTRG滴鼻免疫组和灌胃免疫组小鼠血清抗体IgG高于其它组，且高于疫苗肌肉注射组，LTRG滴鼻免疫组与疫苗滴鼻免疫组差异显著（0.01　　 猪瘟脾淋巴苗分别与LTKG、LTRG蛋白佐剂混合，通过滴鼻、灌胃/口服、肌注三种途径免疫仔猪，间隔10-15天二免、三免。采血，收集鼻洗液和粪便。经间接ELISA检测血清抗体IgG及局部粘膜抗体IgA。整个免疫过程中，血清IgG一直保持较高的抗体水平。三免后14天，口服疫苗+LTKG的猪血清抗体IgG显著高于疫苗经肌注和滴鼻免疫的猪（0.01　　 上述试验结果表明，猪瘟脾淋巴苗分别与LTRG和LTKG粘膜佐剂经粘膜免疫途径共免疫小鼠、猪，均可诱导机体产生较好的体液免疫和细胞免疫反应，以及局部粘膜免疫反应。尤其是粘膜分泌型抗体的产生，为在局部中和野毒感染提供了保护屏障，能更有效发挥机体免疫预防机能。

目录

文摘

英文文摘

符号说明

上篇 文献综述

第一章 猪瘟疫苗的研究进展

1 猪瘟病毒的概述

2 猪瘟疫苗

3 猪瘟新型疫苗制剂研发的必要性

4 参考文献

第二章 大肠杆菌热敏性肠毒素作为粘膜佐剂的研究进展

1 LT的佐剂功能

2 LT突变体的研究

参考文献

下篇 试验研究

第三章 大肠杆菌热敏性肠毒素突变体发酵表达及纯化

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

参考文献

第四章 猪瘟疫苗与LT突变体免疫小鼠试验

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

参考文献

第五章 猪瘟疫苗与LT突变体免疫猪试验

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

参考文献

全文总结

附录

致谢