兔神经肽S及其受体基因的克隆、组织表达及热应激对其表达的影响

摘要

神经肽S（neuropeptideS，NPS）是2002年发现的一种神经肽，由20个氨基酸组成，通过激活其受体NPSR而发挥作用，因其氨基端残基在所有已测定动物均为丝氨酸（serine，S），故ReinscheidRK等人将其命名为神经肽S（NPS）。NPS及其受体主要分布于中枢神经系统，外周器官也有少量分布。NPS/NPSR系统参与调节广泛的生理功能，包括唤醒、觉醒、焦虑、摄食、巨噬细胞免疫应答和氧化损伤等。目前在大鼠和小鼠有关NPS的研究报道较多，但未见有关兔NPS及其受体基因克隆和组织表达的报道。因此本文用RT-PCR方法开展了这方面的研究，克隆了兔NPS及其受体基因，研究了其组织分布，并探讨了热应激对兔下丘脑-垂体-肾上腺轴NPS及其受体mRNA表达的影响。结果如下：
　　 1、利用同源克隆方法首次从兔脑组织中克隆得到NPS基因的全长编码序列（CDS）及NPSR部分CDS序列。兔NPS基因长为270bp，NPSR基因长为847bp，并将它们登录在Genebank上，基因登录号分别为EU978456和FJ713102。兔NPS前体基因与黑猩猩、九带犰狳、人和马NPS前体基因氨基酸同源性较高，分别为76.7％、75.6％、75.6％和75.6％。兔NPS前体基因与大鼠、牛、小鼠、狗、负鼠、鸡、豚鼠、鼩鼱，猕猴和加氏大婴猴氨基酸序列同源性在52.2％-71.1％之间。NPS基本上是保守的，在NPS基因前半部分在不同物种之间存在一定差异。对14个物种比对显示NPS前体在进化过程中相对保守，只是在不同物种进化分支之间存在着局部差异，符合种属间的进化亲缘关系。
　　 2、用RT-PCR方法对兔体内NPS及NPSR基因的表达进行了研究，结果显示，NPS及NPSRmRNA在兔脑桥、下丘脑、垂体、脑干、脊髓、胃、胆囊、十二指肠、空肠、回肠、结肠、盲肠、心、肝、脾、肺、肾、睾丸、子宫、卵巢、主动脉、胰、唾液腺、甲状腺、胸腺和乳腺等组织器官中均有表达，主要在中枢神经系统表达，在外周组织器官低水平表达，该结果与在大鼠上获得的结果基本相似。
　　 3、用相对定量RT-PCR方法，对24只新西兰白兔在热应激条件下（42℃，对照组、0.5h、1h和2h，n=6）下丘脑-垂体-肾上腺NPS及NPSRmRNA表达的变化规律进行了研究。结果如下
　　 新西兰白兔在热应激条件下NPS及NPSRmRNA在下丘脑、垂体和肾上腺均有表达，但具有不同的表达模式。
　　 热应激后NPSmRNA在下丘脑表达水平逐渐升高，1h时表达丰度最高，与对照组差异极显著（P<0.01），随后2h组下降。热应激后NPSmRNA在肾上腺0.5h组达到最高，与对照组差异极显著（P<0.01），随后呈下降趋势。热应激后NPSmRNA在垂体具有不同的表达模式，实验组均呈下降趋势，且与对照组差异均为极显著（P<0.01）。
　　 NPSRmRNA与NPS在下丘脑垂体肾上腺的表达模式趋于一致。
　　 以上结果表明兔NPS及其受体基因在进化上是保守的；热应激时NPS及其受体基因在HPA轴上的表达发生变化，提示NPS系统可能在热应激中发挥一定的生理作用，其实验结果为研究兔NPS系统的生理功能提供了实验资料。

目录

文摘

英文文摘

缩略语的中英文对照

第一篇 文献综述

第一章 神经肽S（NPS）及其受体的研究进展

1 NPS的发现与命名

2 NPS及其受体的结构

3 NPS及其受体的分布定位

4 NPS的生理功能

第二章 热应激研究进展

1 应激与热应激的概念

2 应激对神经内分泌的影响

3 热应激对兔的生理影响

4 NPS与应激

参考文献

第二篇 实验研究

第三章 兔NPS及其受体基因的克隆及组织表达

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 结论

参考文献

第四章 热应激对兔下丘脑-垂体-肾上腺轴NPS及NPSR mRNA表达的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 结论

参考文献

全文总结

致谢

攻读硕士学位期间发表的文章