闪光鲟中草药免疫增强剂的筛选及其非特异性免疫增强效果的研究

摘要

本文以闪光鲟为对象，研究四种复方中草药对其生长、生理生化、抗氧化及非特异性免疫指标的影响，并探索了四种复方中草药对闪光鲟免疫相关基因C1q、HSP70、HSP90基因表达量的影响。本试验分为四个试验组（复方一组、复方二组、复方三组和复方四组）和1个对照组，每个处理组均设置3个平行组，每个平行组10尾试验鱼。四个试验组基础饲料中分别添加复方一、复方二、复方三和复方四;对照组饲喂基础饲料。试验结果如下:
　　(1)试验鱼临床表现无异常，与对照组相比，复方一、二组闪光鲟增重率显著升高(P＜0.05)，复方四组肝体比显著升高(P＜0.05);复方一组总蛋白含量增加较显著（P＜0.05），复方一、三、四组白蛋白含量与对照组相比显著增加(P＜0.05);与对照组相比，复方二、四能显著降低血清中尿酸含量，复方四能显著提高葡萄糖含量，复方三能显著降低尿素氮含量（P＜0.05）;复方二组谷草转氨酶、碱性磷酸酶与对照组相比显著增高(P＜0.05)，乳酸脱氢酶与对照组相比显著降低(P＜0.05);复方二、三、四组总胆红素与对照组相比显著降低(P＜0.05)。结果表明，在饲料中添加复方中草药能改善闪光鲟的部分血液生化指标。
　　(2)复方一能显著提高肝中T-SOD活性，显著降低血清、肝和脾中MDA含量;复方二能显著提高血清中T-AOC、T-SOD活性，脾中溶菌酶含量、T-SOD活性，肾T-AOC活性，显著降低肝中MDA含量;复方三能显著提高血清中T-SOD、CAT活性，脾中溶菌酶含量、T-SOD、CAT活性;复方四能显著提高血清中溶菌酶、T-NOS含量、CAT活性，肝中溶菌酶、T-SOD活性，显著降低血清和脾中MDA含量;各试验组血清和肝中GSH-PX活性较对照组均出现显著升高。综上所述，在饲料中添加复方中草药可促进闪光鲟非特异性免疫及抗氧化能力的提升，且以复方四效果最佳。
　　(3)复方一能显著提高闪光鲟脾、肝、肾组织中C1q基因表达量及血清、肝、肾中HSP90基因表达量;复方二能显著增加血细胞、肝、脾、肾组织中C1q基因表达量，血细胞及肝组织中的HSP70基因表达量也显著提高，血清、肝、脾中的HSP70基因表达量也显著提高;复方三能显著提高肾、脾、肝组织中C1 q、HSP90基因表达量，显著提高血细胞中C1q和HSP70基因表达量;复方四能显著提高血清、血细胞、肝、脾、肾组织中HSP70基因表达量。结果表明:饲料中添加四种复方中草药均能一定程度上提高闪光鲟血清、血细胞、肝、脾、肾组织中C1 q、HSP70、HSP90免疫相关基因的表达量。从研究结果看，复方四可作为免疫添加剂定期在鲟鱼养殖饲料中添加，以改善鱼体健康及抗病状况，并在一定程度上促进生长。

目录

声明

摘要

符号及缩略语

第一章 综述

1 闪光鲟研究进展

1．1 闪光鲟简介

1．2 闪光鲟养殖现状

2 鱼类的非特异性免疫

2．1 抵御疾病

2．2 自身稳定

2．3 热休克蛋白(HSPs)

3 常见中草药成分及作用机理

3．1 中草药的优点

3．2 中草药的有效成分

4 本研究使用及常见的中草药

4．1 贯众

4．2 黄芪

4．3 茯苓

4．4 板蓝根

4．5 金银花

4．6 大黄

4．7 紫草

4．8 大青叶

4．9 山豆根

4．10 桔梗

4．11 桑叶

5 中草药免疫增强剂在水产养殖上的应用

5．1 中草药对鱼类生长及生理生化指标的影响

5．2 中草药对鱼类抗氧化能力的影响

5．3 中草药对鱼类非特异性免疫能力的影响

6 本研究的目的及意义

7 本研究技术路线

第二章 复方中草药对闪光鲟生长及血液生化指标的影响

1 材料

1．1 试验鱼

1．2 中草药

2 试验方法

2．1 试验设计

2．2 试验饲料的制备

2．3 养殖管理

2．4 生长指标与血液指标

2．5 数据处理

3 试验结果

3．1 复方中草药对闪光鲟生长状况的影响

3．2 复方中草药对闪光鲟血液生化指标的影响

4 分析讨论

4．1 复方中草药对闪光鲟生长性能的影响

4．2 复方中草药对闪光鲟血液生化指标的影响

第三章 复方中草药对闪光鲟抗氧化能力及非特异性免疫力的影响

1 材料

1．1 试验鱼

1．2 中草药

1．3 主要仪器设备

1．4 主要试剂、药品

2 试验方法

2．1 试验饲料的制备

2．2 养殖管理

2．3 样品采集

2．4 抗氧化能力、非特异性免疫力指标及测定方法

2．5 数据处理

3 试验结果

3．1 复方中草药对闪光鲟溶菌酶含量的影响

3．2 复方中草药对闪光鲟T-NOS含量的影响

3．3 复方中草药对闪光鲟T-AOC活性的影响

3．4 复方中草药对闪光鲟T-SOD活性的影响

3．5 复方中草药对闪光鲟MDA含量的影响

3．6 复方中草药对闪光鲟GSH-PX活性的影响

3．7 复方中草药对闪光鲟CAT活性的影响

4 分析讨论

第四章 复方中草药对闪光鲟C1q、Hsp70、Hsp90基因表达的影响

1 材料

1．1 试验鱼

1．2 中草药

1．3 主要仪器设备

1．4 主要试剂、药品

2 试验方法

2．1 试验饲料的制备

2．2 养殖管理

2．3 样品采集

2．4 总RNA的提取

2．5 引物设计

2．6 第一链cDNA的合成与实时定量PCR

2．7 数据处理

3 结果

3．1 复方中草药对闪光鲟组织中C1q基因表达的影响

3．2 复方中草药对闪光鲟组织中Hsp70基因表达的影响

3．3 复方中草药对闪光鲟组织中Hsp90基因表达的影响

4 讨论

4．1 复方中草药对闪光鲟组织中C1q基因表达的影响

4．2 复方中草药对闪光鲟组织中Hsp70、Hsp90基因表达的影响

第五章 结论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间作者发表论文情况