RFRP-3在湖羊雄性生殖器官中的表达及其受营养水平的影响

摘要

湖羊作为一个高繁殖力绵羊品种，目前的研究主要集中在雌性湖羊的繁殖生理，而对雄性湖羊的繁殖生理关注较少。2000年，日本科学家Tsutsui等从日本鹌鹑脑内成功分离提纯一种RF酰胺肽，进一步分析发现，其为C末端具有RF酰胺的十二肽，而且对鸟类垂体前叶GnRH的分泌有抑制作用，故命名为促性腺激素抑制激素（Gonadotropin-inhibitory hormone，GnIH）。RF酰胺相关肽-3(RFamide-relatedpeptide-3，RFRP-3)是GnIH在哺乳动物体内的同系物，它可以调节哺乳动物的繁殖、摄食、焦虑、应激和能量平衡等行为，是目前生殖生物学领域研究的热点之一，已在多种动物的不同组织均有表达，但其在雄性湖羊生殖系统中的表达情况还不清楚。本试验主要利用荧光定量PCR、免疫组化等技术，以10日龄、4月龄和8月龄的雄性湖羊的睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾和输精管为研究对象，检测RFRP-3在其发育过程中各组织的定位及表达情况;再以6月龄湖羊雄性生殖器官为研究对象，分析不同营养水平饲喂下，RFRP-3、GnRHR、FSHR和LHR基因在雄性湖羊生殖器官的表达变化，旨在研究分析RFRP-3在雄性湖羊生殖器官生长发育过程中的作用，以及其参与繁殖营养调控的作用。主要的研究结果如下:
　　1.RFRP-3蛋白在湖羊雄性生殖器官发育过程中的定位研究。RFRP-3蛋白主要分布于8月龄湖羊睾丸的生精小管内部、输精管及附睾;RFRP-3蛋白在8月龄湖羊附睾的假复层柱状上皮和输精管的粘膜层中强烈表达，而在4月龄和10日龄湖羊生殖器官中微弱表达。
　　2.RFRP-3基因在湖羊雄性生殖器官发育过程中的定量研究。在10日龄湖羊组中，RFRP-3基因在附睾头、附睾体、附睾尾、睾丸和输精管组织中表达量差异不显著。在4月龄和8月龄湖羊组中，RFRP-3基因在附睾头、附睾体、附睾尾和睾丸的表达量差异不显著，而在输精管中的表达量显著高于其他组织(P＜0.05)。此外，在同一月龄不同组织中RFRP-3基因mRNA表达水平也存在一定的差异。
　　3.不同营养水平下对湖羊雄性生殖器官中RFRP-3、GnRHR、FSHR和LHR基因mRNA表达的影响。在高能高蛋白水平饲喂下，RFRP-3基因在雄性湖羊生殖器官中表达量显著低于正常饲喂水平，而GnRHR、FSHR和LHR基因mRNA表达量显著高于正常饲喂水平。
　　以上试验结果证明，RFRP-3在湖羊雄性生殖器官中广泛分布，其表达量在湖羊不同生殖器官、不同月龄和不同饲喂水平条件下差异显著。本研究为进一步探讨RFRP-3的生物功能以及其参与动物繁殖营养调控研究提供了理论依据，但其具体的调节机制以及与其它调节因子之间的相互作用还需要进一步的研究。

目录

声明

论文说明

摘要

英文缩略词

引言

第一章 RFRP-3／GnIH的研究进展

1 RFRP-3／GnIH的发现及命名

2 RFRP-3／GnIH在动物体内的分布

3 RFRP-3／GnIH的生理功能

3．1 RFRP-3／GnIH对生殖的调节

3．2 RFRP-3／GnIH与摄食行为

3．3 RFRP-3／GnIH与焦虑行为

3．4 RFRP-3／GnIH与应激行为

3．5 RFRP-3／GnIH与能量平衡

4 RFRP-3／GnIH的研究意义和展望

参考文献

第二章 RFRP-3在湖羊雄性生殖器官中的分布定位研究

1 材料与方法

1．1 试验材料

1．2 试验方法

1．3 观察结果与统计

2 结果与分析

2．1 RFRP-3在10日龄湖羊雄性生殖器官定位的研究

2．2 RFRP-3在4月龄湖羊雄性生殖器官定位的研究

2．3 RFRP-3在8月龄湖羊雄性生殖器官定位的研究

3 讨论

4 小结

参考文献

第三章 RFRP-3在湖羊雄性生殖器官发育过程中基因表达水平的研究

1 材料与方法

1．1 试验材料

1．2 组织总RNA提取与反转录

1．3 定量PCR

2 结果与分析

2．1 总RNA的提取结果

2．2 RFRP-3与β-actin扩增结果

2．3 目的基因RFRP-3与β-actin扩增曲线和溶解曲线

2．4 相同月龄湖羊各组织RFRP-3基因表达的研究

2．5 不同月龄湖羊各组织RFRP-3基因表达的研究

3 讨论

4 小结

参考文献

第四章 不同饲喂水平对RFRP-3、GnRHR、FSHR和LHR基因在湖羊雄性生殖器官表达的影响

1 材料与方法

1．1 试验日粮配方与饲养管理

1．2 主要试剂盒与仪器设备

1．3 组织样采集

1．4 总RNA提取

1．5 RNA反转录

1．6 引物设计

1．7 荧光定量PCR

1．8 统计分析

2 结果与分析

2．1 不同饲喂水平下雄性湖羊的生长发育变化

2．2 PCR扩增结果

2．3 目的基因GnRHR、FSHR和LHR扩增曲线和溶解曲线

2．4 RFRP-3 mRNA在不同饲喂水平下湖羊雄性生殖器官的表达变化

2．5 GnRHR mRNA在不同饲喂水平下湖羊雄性生殖器官的表达变化

2．6 FSHR mRNA在不同饲喂水平下湖羊雄性生殖器官的表达变化

2．7 LHR mRNA在不同饲喂水平下湖羊雄性生殖器官的表达变化

3 讨论

4 小结

参考文献

全文结论

创新点

附录

攻读学位期间发表的学术论文

致谢