中华鳖输卵管Telocyte的特性研究

摘要

输卵管是脊椎动物重要的生殖器官，参与和调控卵子的运输、成熟、储存、受精与早期胚胎发育，但各种动物输卵管的组成与结构存在差异。中华鳖是我国养殖面积最大的爬行动物，不仅具有重要的经济价值，而且具有特殊的精子储存现象。中华鳖输卵管由漏斗部、蛋白分泌部、峡部、子宫部和阴道部5段组成，其中峡部、子宫部和阴道部前段是发生精子储存的部位。新近在哺乳动物器官中发现了一种特异的细胞-Telocyte（暂时翻译为远细胞），参与体内许多器官（尤其是管状器官）的功能活动与调节。但Telocyte在非哺乳动物的分布与作用未见资料报道。本文利用形态学方法和细胞生物学技术，观测鉴定Telocyte在中华鳖输卵管精子储存部位（包括峡部、子宫部和阴道部）的分布，分析其超微结构特点，阐明Telocyte及其突起与周围环境和细胞的形态联系。进一步在分子水平上探究Telocyte标记物-CD34 mRNA在输卵管的表达。首次在哺乳类之外的动物体内鉴定发现telocyte的分布及其特性，研究结果为阐明中华鳖精子储存机理提供细胞分子基础。
　　实验Ⅰ中华鳖输卵管阴道部telocytes的超微结构与免疫组化特征
　　Telocytes是2005年新发现的一种间质细胞，由Popescu和他的同事命名，目前已经在哺乳动物不同类型的组织和器官中被确认存在，但阴道部中未见资料报道(www.telocytes.com)。本研究利用透射电镜和免疫组化探查中华鳖输卵管阴道部telocytes的分布、超微结构以及它们与周围细胞的形态关系。结果显示，telocytes王要位于单层柱状上皮下方结缔组织中，靠近分泌腺细胞处可见Tcs及其突起，有些Tcs及其突起与肥大细胞和胶原纤维密切相关。Tcs及其突起呈CD34免疫反应阳性。在细胞水平上显示Tcs在中华鳖输卵管阴道部的定位，它们的细胞标记与哺乳类具有同源性。研究结果为理解阴道功能及防治阴道疾病提供了新视角。
　　实验Ⅱ中华鳖输卵管子宫部telocytes的超微特征
　　Telocytes(Tcs)与体内许多机能调节和某些疾病发生有关。Tcs具有极其细长的突起(telopodes，Tps)，可伸达远端，有人将其翻译为远（端）细胞。Tps由细段(podomers)和膨大部(podoms)交替排列，呈串珠样结构。Tcs的研究报道全部为人和哺乳动物的资料，已经在心、肺、肾、消化道等器官组织中被鉴定发现。应用透射电镜对中华鳖子宫部Tcs的超微结构特性进行了观察鉴定，结果显示中华鳖输卵管子宫部具有Tcs分布，而且主要位于子宫固有膜结缔组织中，胞体结构完整，突起细长，与神经末梢、毛细血管、胶原纤维束以及子宫腺密切相关。这种结构关系表明，Tcs及其突起具有参与中华鳖子宫收缩及其腺体分泌的形态学特征。
　　实验Ⅲ中华鳖输卵管峡部telocytes的特征
　　Telocytes拥有一个很小的细胞体，很细长的telopodes(Tps)，且podomers与podoms交替排布。Tps释放3种胞外小泡:外来体，核外颗粒体及多泡小体，这些都参与旁分泌信号传导。本研究通过透射电镜及免疫组化研究中华鳖输卵管峡部内telocytes的超微形态特征及其结构功能。峡部具有不同形状的telocytes，这些形态取决于突起的数量。分布位置与输卵管子宫部相似，一般位于黏膜固有层。重要的发现是，telocytes参与细胞外囊泡的分泌和转运。该研究第一次揭示了中华鳖输卵管峡部内TCs的存在及其分布，并在超微水平上显示Tcs具有分泌和转运细胞外囊泡的功能。
　　实验Ⅳ CD34 mRNA在中华鳖输卵管的表达
　　造血祖细胞CD34 Telocytes的一种特异标记物。本文应用qRT-PCR技术分析了CD34-mRNA在中华鳖输卵管的表达动态。CD34基因表达于输卵管蛋白分泌部、峡鄙、子宫部和阴道部4段，与之对应，透射电镜下大量的Telocytes细胞分布于中华鳖输卵管壁内。CD34 mRNA的表达水平具有区域性差异，子宫部最高，阴道部次之，峡部中等，而蛋白分泌部表达最低。这种表达区域性差异可能与输卵管节律性蠕动的调控有关。

目录

声明

ACKNOWLEDGEMENTS

Contents

ABSTRACT

摘要

List of Abbreviations

CHAPTER 1 Introduction

1 The need for studying the Telocytes in oviduct

2 Research goals

CHAPTER 2 Literature Review

Part-Ⅰ Chinese soft shelled turtle，Pelodiscus sinensis

1 Introduction

2 Description

3 Scientific classification

4 Habitat

5 Distribution

6 Movement

7 Diet

8 Relationship with humans

9 Life cycle

Part Ⅱ The female reproductive tract of the Chinese soft shelled turtle

Part-Ⅲ Telocytes

1 Brief Introduction of Telocytes

References

Chapter3 (Experiment Ⅰ) Ultrastructural and immunohistochemical characteristics of telocytes in the vagina of the Chinese soft-shelled turtle，Pelodiscus sinensis

1 Introduction

2 Materials and methods

2．1 Ethical Approval

2．2 Experimental Animals

2．3 Transmission electron microscopy(TEM)

2．4 Immunohistochemistry

3 Results

4 Discussion

5 Conclusion

References

Chapter4 (Experiment Ⅱ) Identification and characterization of telocytes in the uterus of the oviduct in Chinese soft shelled turtle，Pelodiscus Sinensis

1 Introduction

2 Matedals and methods

2．1 Ethical Approval

2．2 Experimental Animals

2．3 Transmission electron microscopy(TEM)

2．4 Immunohistochemistry

3 Results

4 Discussions

5 Conclusion

References

Chapter 5 (Experiment Ⅲ) Identification and Ultrastructural characterization of telocytes in the Isthmus of the oviduct of Chinese soft shelled turtle，Pelodiscus sinensis

1 Introduction

2 Materials and methods

2．1 Ethical Approval

2．2 Experimental Animals

2．3 Transmission electron microscopy(TEM)

2．4 Immunohistochemistry

3 Results

4 Discussion

5 Conclusion

References

CHAPTER 6 (Experiment Ⅳ) The Expression of CD34 mRNA in the Oviduct of Chinese soft shelled turtle，Pelodiscus sinensis

1 Introduction

2 Matedals and Methods

2．1 Ethical approval and Experimental Animals

2．2 Sterilization of glass-ware and plastic-ware

2．3 Total RNA extraction

2．4 Complimentary DNA (cDNA) construction

2．5 Real-Time Quantitative Polymerase Chain Reaction(RT-qPCR)

2．6 Statistical analysis

3 Results

4 Discussion

5 Conclusion

References

Summary

Conclusion

Innovation

Future Research Directions

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