四种杀虫剂的单组分和多组分免疫侧向层析检测方法的研究

摘要

有机磷类和烟碱类农药是我国常用的杀虫剂，在带来农业经济效益的同时，也间接或直接的会对人畜和环境造成危害。当前报道的农药检测方法主要有仪器分析法如气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)以及两者分别与质谱联用的分析方法(GC-MS或HPLC-MS)。这些传统检测方法虽然灵敏度高，选择性好，但其需要对样品进行复杂的前处理，时间长，设备昂贵，成本高，对操作人员专业要求高，不利于现场检测。因此建立对有机磷类和烟碱类农药的单组分或多组分的快捷、低成本、高灵敏度的检测分析方法，对社会经济、民生安全都具有十分重要的意义。
　　杀螟硫磷、甲基毒死蜱和水胺硫磷属于有机磷类农药，杀螟硫磷的化学结构式为O，O二甲苯-O-（3-甲基-4-硝基苯基）硫代磷酸酯，主要通过触杀、胃毒作用防治如二化螟、稻纵卷叶螟、三化螟等鳞翅目农业害虫，还可用于防治鞘翅目、半翅目害虫。甲基毒死蜱的化学结构式为O，O-二甲基-O-3，5，6-三氯-2-吡啶基硫逐磷酸酯，可通过触杀、胃毒和熏蒸来防治储粮害虫以及蚊成虫、蝇类、水生幼虫等卫生害虫，且无内吸性，具有高效低毒和杀虫谱广的特点。水胺硫磷化学结构式为O-甲基-O-（邻异丙氧基羰基苯基）氨基硫代磷酸酯，其在防治危害粮、棉、果等作物的多种害虫上具有良好的触杀、胃毒作用，杀螨、杀卵效果显著。吡虫啉（1-（6-氯吡啶-3-吡啶基甲基）-N-硝基亚咪唑烷-2-基胺）属于烟碱类杀虫剂，具有多重功能如触杀、胃毒和内吸作用，且在内吸活性，植物木质部中的移动性，土壤里的稳定性方面优势显著，主要用于防治农业害虫中同翅目的叶十婵、飞虱、蚜虫和缨翅目的蓟马等。
　　本文以杀螟硫磷为对象，建立了一种单通道免疫层析试纸条分析方法(ICA);以甲基毒死蜱、吡虫啉和水胺硫磷为对象，建立了一种基于裸眼可同时半定量检测的三通道免疫层析试纸条分析方法(LFIA)。这两种分析方法均基于竞争性免疫反应。杀螟硫磷的单通道免疫层析试纸条分析方法(ICA)可通过NC膜上的检测线显色强度对杀螟硫磷进行可视性分析。在优化的实验条件下，对杀螟硫磷的检测限为300μg/L，可视检测限为6.25μg/L。三通道免疫层析试纸条分析方法(LFIA)则可通过分别分析NC膜上三条检测线的显色强度，从而以可视性检测三种农药浓度。通过调节抗体与抗原的浓度控制试纸条对农药的检测阈值，我们将不同检测阈的试纸条组合在一起，建立了多组分免疫侧向层析检测方法。在优化的实验条件下，通过视觉观测LFIA试纸条可以检测到甲基毒死蜱和水胺硫磷的浓度范围均为:0-100μg/L（阴性样品），100-600μg/L，600-2000μg/L，2000-6000μg/L和≥6000μg/L（阳性样品），吡虫啉的浓度范围:0-50μg/L（阴性样品），50-200μg/L，200-500μg/L，500-2000μg/L和≥2000μg/L（阳性样品）。在实验室条件下，用建立的LFIA方法检测添加了农药的土壤和小青菜样品中的农药残留量，并且用HPLC对检测结果进行了验证。本研究基于ICA检测方法建立了可同时半定量检测三种杀虫剂残留的分析方法。两种检测方法均具有快捷简便、成本低、灵敏度高的优点，为农药残留的现场快速检测提供了方法与理论依据。

目录

声明

摘要

上篇 文献综述

第一章 农药残留检测技术研究现状

1 农药残留的产生与危害

2 农药残留检测技术研究进展

第二章 农药等小分子化学品免疫分析方法研究进展

1 农药等小分子化学品抗原制备技术

2 农药等小分子化学品抗体制备技术

3 农药等小分子化学品免疫分析技术

下篇 研究内容

第三章 杀螟硫磷单组分免疫层析试纸条分析方法的建立

1 引言

2 材料与方法

3 结果与分析

4 讨论

第四章 吡虫啉、甲基毒死蜱和水胺硫磷三通道免疫层析试纸条分析方法的建立

1 引言

2 材料与方法

3 结果与分析

4 讨论

参考文献

附录

致谢

攻读学位期间发表的学术论文和申请的专利