菊花花色芽变分离鉴定及‘白安娜’遗传转化体系的建立

摘要

菊花（Chrysanthemum morifolium Ramat.）原产我国，为菊科菊属栽培种，具有很高的观赏和经济价值，是我国十大传统名花和世界四大切花之一。我国是菊花的起源中心和菊属种质资源的分布中心，虽然其种质资源丰富，栽培品种繁多，花色、花型丰富，但菊花的遗传背景和栽培方式多种多样，在生产过程中易发生变异。花色作为其重要的观赏性状，对花色变异的研究也一直倍受关注，中国传统菊花共有3000多个品种，其中400多个品种都是芽变选种获得。我们通过在田间选择花色发生变异的菊花品种，以花色变异的花瓣作为外植体，通过组织培养技术再生分离芽变的性状，通过SRAP标记分析鉴定‘绿安娜’系列芽变后代，并建立其芽变品种‘白安娜’的遗传转化体系，研究结果可为菊花花色芽变及基因工程育种奠定基础。主要研究结果如下:
　　1.以在田间观察到的12个花色芽变菊花品种为材料，通过组织培养技术分离芽变性状，获得了‘绿安娜’、‘QX-166’、‘南农功勋’3个菊花品种芽变材料的分离后代。对‘绿安娜’芽变分离后代的花色进行观察，发现后代花色存在分离，可能与来源芽变花瓣不同部位有关。
　　2.用筛选的40对引物对分离获得及收集保存的‘绿安娜’系列芽变后代进行SRAP分析，共获得扩增条带423条，但在‘绿安娜’与8个芽变后代中均未扩增出多态性条带，没有获得引起花色芽变的特异性位点，说明系列花色芽变可能仅涉及点突变。另外，还可能与我们筛选的引物组合有限有关。
　　3.以‘绿安娜’芽变分离后代‘白安娜’为试验材料，建立了高效遗传转化体系。以‘白安娜’无菌苗叶片为外植体，发现在MS+6-BA1.0 mg·L-1+NAA0.5mg·L-1分化培养基上，分化率最高，为67.78％;以潮霉素(Hyg)作为遗传转化的筛选标记，结果表明，8 mg·L-1作为叶盘分化的选择压较为合适;8 mg·L-1为生根筛选的适宜浓度。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

引言

第一章 文献综述

1 花色形成的机理

1．1 花瓣的组织结构与花色形成

1．2 花色素的种类

1．3 液泡pH值对花青素呈色的影响

1．4 金属离子对花青素呈色的影响

2 菊花花色的研究概况

2．1 菊花花色发展历史

2．2 菊花花色演变规律

2．3 菊花花色遗传规律

2．4 菊花花色育种

3 菊花芽变的研究概况

3．1 菊花芽变的发生

3．2 菊花芽变的遗传机制

3．3 菊花芽变在育种中的应用

3．4 芽变品种的分子鉴定技术

4 本研究的目的意义

第二章 菊花花色芽变观察及芽变性状的分离

1 试验材料

1．1 供试材料

1．2 试剂与仪器

1．3 培养基与培养条件

2 试验方法

2．1 菊花花色芽变材料形态特征观察

2．2 花色芽变性状的组培分离

3 结果与分析

3．1 芽变材料的主要形态特征观察

3．2 芽变材料分离后代无菌苗的获得

3．3 ‘绿安娜’芽变分离后代的花色观察

4 讨论

第三章 ‘绿安娜’系列芽变后代的SRAP分析

1．1 供试材料

1．2 试剂与仪器

1．3 试验方法

1．4 数据的统计与分析

2 结果与分析

2．1 基因组DNA的质量检测

2．2 引物组合的筛选

2．3 多态性的分析

3 讨论

第四章 ‘白安娜’遗传转化体系的建立

1 材料与方法

1．1 供试材料

1．2 试剂与仪器

1．3 培养基与培养条件

2 试验方法

2．1 菊花叶片不定芽的分化诱导

2．2 抗生素选择压力的确定

3 结果与分析

3．1 NAA和6-BA对‘白安娜’叶片不定芽分化的影响

3．2 抗生素对‘白安娜’叶盘再生和生根的影响

4 讨论

4．1 菊花高频再生体系的建立

4．2 影响菊花再生的因素

4．3 抗生素选择压的确定

全文结论及创新点

附录

参考文献

致谢