猪神经肽B及其受体的基因克隆、分布及NPB和NPW对生殖相关细胞功能的研究

摘要

神经肽B(Neuropeptide B，NPB)是2002年从牛的下丘脑中提取的一种神经肽，因其是第一个被发现溴化的神经肽，故命名为神经肽B。NPB有两种形式，NPB23和NPB29，但是在哺乳动物中只在人上发现NPB23的存在。神经肽W(Neuropeptide W)是2002年Shimomura从猪下丘脑中分离的一种神经肽，由于其第一个和最后一个氨基酸为色氨酸（Trp，缩写为W），故命名为神经肽W，NPW有NPW23和NPW30两种形式，分别含有23和30个氨基酸。NPW和NPB是G蛋白藕联受体GPR7和GPR8的内源性配体，这两种受体被重新命名为NPBWR1和NPBWR2。以往的文献报道证实，NPB和NPBWR1在哺乳动物动物体内广泛分布，参与摄食、神经内分泌、生殖、炎性疼痛和情绪等多种生理功能的调节。自NPB被发现以来，在人、鼠已有过大量对其基因结构、分布定位及生理功能的研究，但尚未见到在猪上的研究报道。因此，本文以猪为研究对象，采用电子克隆、RT-PCR、QPCR、免疫组化和放射免疫等方法，克隆了猪NPB及其受体的基因，研究其mRNAs在组织器官中的表达，NPBWR1和NPBWR2在猪卵巢颗粒细胞和睾丸间质细胞的分布以及NPB和NPW对这两种细胞增殖和激素分泌的影响，为深入研究NPB和NPW对猪生殖调控奠定了基础。 一、猪NPB和NPBWR1的基因克隆和组织表达 本实验采用电子克隆的方法克隆了猪NPB和NPBWR1的基因序列并进行了生物信息学的分析，通过QPCR的方法研究了其mRNAs在猪全身各组织器官的表达情况。结果如下: 1、本次克隆得到猪NPB和NPBWR1的全长序列，片段大小分别是372bp、993bp。猪NPB和NPBWR1基因与其他物种在核苷酸和氨基酸水平均具有较高的同源性。 2、NPB及其受体NPBWR1mRNAs在猪中枢神经系统和外周组织器官广泛分布。 二、NPBWR1和NPBWR2在猪生殖相关细胞的表达与分布 本实验采用RT-PCR和免疫组化的方法研究了NPB受体在卵巢颗粒细胞和睾丸间质细胞的表达和分布，结果如下: 1、NPBWR1和NPBWR2mRNAs在猪生殖相关细胞上均有表达。 2、通过细胞免疫组化和免疫荧光的方法证实NPBWR1在猪卵巢颗粒细胞和睾丸间质细胞膜上均有分布。 三、NPB和NPW对原代培养的猪生殖相关细胞增殖和激素分泌的影响 不同浓度的NPB和NPW(10-12、10-10、10-8、10-6M)均可促进睾丸间质细胞睾酮的分泌，并呈浓度依赖性。不同浓度的NPB和NPW均可剂量依赖性的促进卵巢颗粒细胞孕酮的分泌。低浓度的NPB和NPW(10-8、10-10M)促进雌二醇的分泌，高浓度的NPB和NPW(10-6M)抑制雌二醇的分泌。NPB和NPW对睾丸间质细胞有促进增殖的作用。

目录

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论文说明

摘要

英文缩写词

绪论

第一章神经肽B及其受体的研究进展

1 神经肽B及其受体的发现及命名

2神经肽B和W的结构

3 NPBWR1和NPBWR2结构

4 NPB及其受体在脑和其他组织中的分布

4．1 NPB的分布定位

4．2 NPBWR1的分布定位

4．3 NPBWR2的分布定位

5 NPB和NPW的生物学功能

5．1摄食与能量平衡

5．2神经内分泌的调节作用

5．3痛觉调节

5．4自主调节

5．5睡眠和觉醒

5．6情绪和行为

5．7生理节律

5．8外周功能

6研究展望

第二章猪NPB及其受体的基因克隆和组织表达

1材料与方法

1．1材料

1．2方法

2 结果

2．1猪NPB和NPBWR1基因克隆

2．2 NPB和NPBWR1在猪体内的表达情况

3讨论

参考文献

第三章NPB和NPW对猪卵巢颗粒细胞和睾丸间质细胞功能的研究

1材料与方法

1．1 材料

1．2方法

1．3统计分析

2结果

2．2 NPBWR1在睾丸间质细胞和卵巢颗粒细胞的分布

2．3 NPB和NPW对睾丸间质细胞和卵巢颗粒细胞激素分泌的影响

2．4 NPB和NPW对睾丸间质细胞增殖的影响

3讨论

参考文献

全文总结

论文创新点

在读期间发表的论文

致谢