高、低密度脂蛋白胆固醇诊断试剂的研制

摘要

以表面活性剂和修饰酶为切入点进行聚乙二醇修饰酶法高、低密度脂蛋白胆固醇均相诊断试剂的研制.修饰酶及表面活性剂共同作用以选择性地解离高或低密度脂蛋白,从而达到检测目的.通过对92种表面活性剂的研究得出HLB在10~13之间的非离子型表面活性剂能迅速地解离脂蛋白,并在其中筛选到能选择性解离HDL的NUST-6及选择性解离LDL的NUST-A;合成了八种各种分子量的单臂及双臂聚乙二醇修饰剂,分别对胆固醇酯酶进行修饰,通过大量实验得出修饰后能减慢脂蛋白的解离速度并能一定程度地选择性解离HDL,但这依赖于试剂中所用表面活性剂;利用NUST-6研制的HDL-C诊断试剂由于其对试剂1中硫酸环糊精及硫酸葡聚糖作用的破坏,对LDL有一定的响应;利用NUST-A所研制的LDL-C诊断试剂反应迅速,选择性较好,但灵敏度不够.

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注释表

第一章文献综述

1.1脂蛋白与胆固醇

1.2高、低密度脂蛋白胆固醇诊断试剂的开发现状

1.2.1 HDL-C测定方法

1.2.2 LDL-C的测定方法

1.2.3均相测定法的技术要求

1.3蛋白质(酶)的聚乙二醇化学修饰概述

1.4胆固醇酯酶的晶体结构

1.5本文研究内容

第二章实验部分

2 PEG修饰剂的合成

2.1实验材料

2.2实验方法

3胆固醇酯酶的修饰，及其浓度、修饰化度与活力的测定

3.1实验材料

3.2实验方法

3.3实验结果

4硫酸α-环糊精的合成

4.1实验材料

4.2实验方法

4.3红外光谱

5 PEGME法测HDL-C试剂1的研制

5.1实验材料

5.2实验方法

6表面活性剂的筛选

6.1实验材料

6.2实验方法

6.3实验结果

7修饰酶的作用

7.1 PEG-CHER修饰化度对选择性的影响

7.2 PEG-CHER活力对选择性的影响

7.3 CHOD对反应活性及选择性的影响

8所研制HDL-C、LDL-C诊断试剂的评价

8.1 HDL-C诊断试剂

8.2 LDL-C诊断试剂

9讨论

9.1修饰酶的评价

9.2 PEGME法测HDL-C中R1的作用

9.3表面活性剂的筛选

9.4修饰酶对酶促反应活性及选择性的影响

9.5所研制的HDL-C、LDL-C诊断试剂的评价

结论

实验所需部分试剂的配制

致谢

参考文献

修改说明