重组血红素加氧酶-1在乳酸球菌中的表达及在大鼠肠道的吸收情况

摘要

目的：利用基因工程技术，在克隆大鼠H0—1基因的基础上，以乳酸乳球菌为载体，构建能够表达具有生物活性H0-1的重组乳酸乳球菌(Iactococcus lactis,LL)，然后观察重组乳酸乳球菌在大鼠肠道的吸收情况。 方法：异硫氰酸胍/酚/氯仿(Trizol法)提取大鼠脾组织总RNA，用逆转录．聚合酶链式反应法(RT-PCR法)合成HO-1基因的cDNA，SDS碱裂解法制备质粒pSEC-E7和pGEM—HO—1，质粒酶切及连接构建pSEC—HO—1并鉴定，用电穿孔法将pSEC-HO-1导入乳酸乳球菌(LL)NZ9000，SDS-PAGE和Western blot鉴定：HO-1基因在NZ9000中表达。制备工程菌口服悬液给大鼠灌胃。 结果：克隆完整的HO-1基因cDNA经序列测定，克隆的HO-1基因序列与Genbank公布的HO-1基因的cDNA序列编码区相同。重组乳酸乳球菌(LL-HO-I)能够表达大鼠HO-1基因表达量约为7.0mg/L。LL—HO-I表达的大鼠HO-1活性为2.386U/mg/h，重组乳酸菌工程菌的HO-1在大鼠肠道2、3天时含量最多。 结论：1.成功克隆了大鼠HO—1基因；2.血红素加氧酶-1重组乳酸乳球菌能够表达具有生物活性的大鼠HO-1；3.重组HO-1能有效被大鼠肠道吸收；同时不引起大鼠肠粘膜损害。

目录

论文说明：缩略词表

声明

第一部分 大鼠HO-1基因克隆和序列测定

第二部分 p工SEC-1的构建及大鼠HO-1基因在乳酸球菌中的表达

第三部分 HO-1重组乳球菌不同天数灌胃在大鼠肠道的吸收情况

参考文献

血红素加氧酶-1的研究进展综述

培训小结

攻读硕士学位期间发表学术论文题目

致谢