兔面神经颅内段牵拉损伤对面神经核运动神经元Caspase-3、Bax及Bcl-2表达的影响

摘要

目的：1．观察牵拉损伤兔面神经颅内段后兔的行为学改变，检测手术侧面神经核运动神经元中Caspase-3、Bax及Bcl-2的表达变化；2．初步探讨一定量的牵拉损伤对面神经核结构的影响，及Caspase-3、Bax和Bcl-2对面神经核运动神经元的作用，为牵拉损伤后面神经功能修复提供理论依据，同时为临床治疗面神经损伤提供新思路。
　　 方法：选取成年健康日本长耳大白兔40只，体重2.2-2.5kg，随机分为假手术组（Sham Group，SH）、牵拉损伤组(Distraction injury Group，DI)。根据本课题前期面神经牵拉安全阈值的实验证实：以牵拉重量及牵拉时间分别为6g、10s作为牵拉损伤的拉力参数，对兔面神经颅内段进行牵拉损伤后，面神经功能出现中度损伤，并且部分恢复。因此，我们手术组用滑轮、精确砝码选取6g、10s作为牵拉损伤的拉力参数，对兔面神经颅内段进行牵拉损伤，假手术组不予以牵拉。DI、SH两组分别以术后1d，7d，14d，21d而各分4个亚组，观察大白兔的行为学改变；HE染色观察手术侧面神经核团(facial nucleus，FN)运动神经元的病理形态学；原位杂交技术(In situ hybridization，ISH)观察手术侧面神经核区Caspase-3mRNA的表达变化；免疫组织化学染色法规察手术侧面神经核区Caspase-3、Bax及Bcl-2等蛋白的表达。
　　 结果：1．行为学变化面神经牵拉损伤后随着时间的延长，出现大白兔面神经瘫痪（Facioplegia，FP），面神经功能障碍表现较为明显，而SH组未出现面神经功能障碍。
　　 2．面神经核HE染色 SH组术侧运动神经元核大而圆，染色浅，胞质内可见块状的尼氏体，细胞结构形态趋于正常；DI7d、DI14d、DI21d组损伤侧面神经核运动神经元变性显著，细胞内空泡增多，核仁偏移，细胞结构形态紊乱。SH组可各时间点FN区运动神经元之间数目无明显差异(P＞0.05);DI1d组FN区神经元数目与同时间点的SH1d相比差异无统计学意义(P＞0.05);DI7d、DI14d、DI21d组FN区运动神经元数目逐渐减少，并且各组之间减少有明显差异(P＜0.05）。
　　 3． Caspase-3mRNA原位杂交实验 Sham组术侧FN区Caspase-3mRNA阳性染色神经元较少，DI组损伤侧阳性细胞较多。SH组各组之间无明显差异(P＞0.05)，DI7d、DI14d、DI21d组术侧阳性细胞数目都较SH组显著增多(P＜0.05)，并以DI7d、DI14d两组较多。从牵拉损伤后第7天表达增加，至第14天达高峰，第21天开始下降，而且Caspase-3mRNA表达高峰较Caspase-3蛋白表达高峰提前。
　　 4．免疫组织化学实验术后第1天DI各组术侧FN区运动神经元Caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白表达量与SH组相比无明显差异（P＞0.05）。术后第7、14、21天，DI组术侧FN去运动神经元Caspase-3蛋白表达量明显增多（P＜0.05），并以DI14d组最高；DI组，除DI1d外各组的Bax蛋白表达阳性细胞与同时间点的SH组相比均明显增高（P＜0.05），并以牵拉损伤后14天蛋白表达最高；Bcl-2蛋白牵拉损伤后7d开始达增加，至14d达高峰后逐渐下降。
　　 结论：1．通过观察行为学，证实对面神经颅内段以6g重量牵拉10s时间作为牵拉参数进行牵拉后，兔面神经功能出现障碍。2．面神经颅内段牵拉损伤后，损伤侧FN运动神经元有Caspase-3、Bax、Bcl-2等凋亡相关蛋白的表达，并且Bcl-2/Bax蛋白比值逐渐降低，Caspase-3mRNA表达增多，随之Caspase-3蛋白表达增多，从而导致面神经核运动神经元的凋亡，进而引起面神经功能障碍。

目录

文摘

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材料与方法

1 材料

2 方法

结果

讨论

结论

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参考文献

周围神经系统损伤后的变化及再生 综述

参考文献

攻读硕士学位期间发表学术论文题目

临床培训小结

致谢