RAD001联合DDP对胃癌细胞株SGC7901/DDP表达VEGF影响的实验研究

摘要

目的：研究mTOR特异性抑制剂RAD001联合DDP对胃癌细胞株SGC7901/DDP表达VEGF的作用，并探讨其相关作用机制。
　　方法：胃癌细胞株SGC7901/DDP细胞培养于含10％胎牛血清、500ng/m1DDP、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的RPMI1640培养液中，分别给予RAD001、DDP及联合干预，实验分为6组:对照组、DDP2.5mg/L组、RAD0012.5nmol/L组、RAD0015nmol/L组、RAD00110nmol/L组及联合用药组(RAD0012.5nmol/L+DDP2.5mg/L)。24h、48h、72h后MTT法检测各组细胞体外增殖情况;48h后，ELISA法检测各组细胞分泌VEGF的情况，免疫细胞化学染色及Western-blot法检测HIF-1α、 VEGF蛋白的表达情况，RT-PCR法检测HIF-1α mRNA、VEGF mRNA的合成情况。
　　结果：1.DDP单独作用于SGC7901/DDP细胞未对细胞增殖产生抑制作用，与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05)。RAD001单独作用于SGC7901/DDP细胞24h后，细胞增殖呈现不同程度的抑制，与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)，且抑制作用具有时间和浓度依赖性。联合用药24h后药物对细胞增殖的抑制效应明显，与对照组、DDP组及RAD0012.5nmol/L，组相比，差异均有统计学意义(P＜0.05)，且具有时间依赖性。2.DDP单独作用于SGC7901/DDP细胞后，细胞分泌VEGF的水平、VEGF的表达情况和VEGFmRNA的合成情况，与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05); RAD001单独作用后，SGC7901/DDP细胞VEGF的分泌减少，VEGF的表达和VEGFmRNA的合成均下降，与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05)，且具有浓度依赖性;联合用药后，VEGF的分泌减少，VEGF的表达和VEGFmRNA的合成明显下降，与对照组、DDP组及RAD0012.5nmol/L组相比差异均有统计学意义(P＜0.05)。3.DDP单独作用于SGC7901/DDP细胞后，HIF-1α的表达和HIF-1αmRNA的合成情况，与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05); RAD001作用于SGC7901/DDP细胞后，HIF-1α的表达和HIF-1αmRNA的合成明显降低，与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)，且具有浓度依赖性。联合作用后细胞中HIF-1α的表达和HIF-1αmRNA的合成显著降低，与对照组、DDP组及RAD0012.5nmol/L组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。4.Pearson相关分析显示，VEGF和HIF-1α蛋白呈正相关(r=0.993，p＜0.01)，VEGFmRNA和HIF-1αmRNA呈正相关(r=0.994，p＜0.01)。
　　结论：1.RAD001能够抑制细胞体外增殖、VEGF的分泌及表达和VEGFmRNA的合成，RAD001联合DDP作用后，抑制效应更强。2.其机制可能与mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路有关。

目录

研究生个人简介

缩略词表

摘要

前言

材料和方法

1 材料

2 方法

3 实验

4 统计学处理

结果

讨论

结论

参考文献

综述 mTOR-HIF-1α-VEGF信号通路在胃癌中的研究进展

攻读硕士学位期间发表学术论文

致谢

声明

论文审阅认定书