经鼻给予人脐血间充质干细胞条件培养基改善大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能恢复

摘要

目的：探讨经鼻给予人脐血间充质干细胞(human umbilical cord bloodmesenchymal stem cells，hUCB-MSCs)条件培养基(conditioned medium，CM)对大鼠脑缺血再灌注(ischemia reperfusion，I/R)损伤的保护作用。
　　方法：1.hUCB-MSCs条件培养基的制备:无菌条件下收集足月健康新生儿的脐带血，分离出人脐血间充质干细胞，并培养、传代，待P3代细胞融合达80％时更换无脐血浆的基础培养基，继续培养24h后收集培养上清液。2.取成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，体重240～280g，采用线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注损伤模型(middle cerebral artery occlusion，MCAO)，缺血时间为2h。造模成功后随机分为空白对照(WT-MCAO)组、培养基对照(DMEM-MCAO)组和条件培养基干预（CM-MCAO）组，每组各15只，WT-MCAO组不给予任何治疗措施;DMEM-MCAO组术后24h开始每天经鼻给予DMEM/F12培养基(10ml/kg);CM-MCAO组术后24h开始每天经鼻给予人脐血间充质干细胞条件培养基(10ml/kg)。其中每组10只大鼠分别在术后1d、7d、14d进行神经功能缺损评分，术后14d取大鼠脑缺血半暗带区组织，进行免疫组织化学方法检测闭锁小带蛋白-1(zonula occludens-1，ZO-1)、咬合蛋白(Occludin)和结蛋白(Desmin)的表达情况。每组另外5只大鼠，在术后5d给予2％伊文思蓝(evans blue，EB)(4ml/kg)尾静脉注射，4h后用生理盐水150ml灌注，取缺血区的脑组织，通过分光光度计法计算伊文思蓝的含量，比较各组伊文思蓝含量的变化。3.结果使用SPSS16.0统计软件进行统计分析，神经功能缺损评分使用广义估计方程(generalize estimatingequation，GEE)进行统计分析，数据以均数±标准差((x)±s)表示，组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，以P＜0.05为差异有统计学意义。
　　结果：1.神经功能缺损评分结果显示:与WT-MCAO组、DMEM-MCAO组相比，术后7d、14d，CM-MCAO组神经功能情况明显改善，差异有统计学意义(P＜0.05)，WT-MCAO组和DMEM-MCAO组相比，差异无统计学意义(P＞0.05);
　　2.免疫组织化学染色结果显示:与WT-MCAO组、DMEM-MCAO组相比，CM-MCAO组缺血半暗带区ZO-1、Occludin、Desmin的表达量均明显增加，差异有统计学意义(P＜0.05)，WT-MCAO组和DMEM-MCAO组比较，差异无统计学意义(P＞0.05);
　　3.血脑屏障通透性评价结果显示:与WT-MCAO组、DMEM-MCAO组相比，CM-MCAO组缺血区的脑组织中伊文思蓝含量显著减少，差异有统计学意义(P＜0.05)，WT-MCAO组和DMEM-MCAO组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　结论：1.经鼻给予人脐带血间充质干细胞条件培养基能够改善脑缺血再灌注损伤后大鼠神经功能恢复。
　　2.经鼻给予人脐带血间充质干细胞条件培养基对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用可能与其提高脑卒中大鼠血脑屏障的完整性，降低血脑屏障通透性有关。

目录

研究生个人简介

缩略词表

摘要

前言

材料和方法

1 材料

2 方法

结果

讨论

结论

参考文献

间充质干细胞的旁分泌机制研究 综述

攻读硕士学位期间发表学术论文

临床培训小结

致谢

声明

论文审阅认定书