Cyclin D1介导FRK对脑胶质瘤增殖及细胞周期调控机制的研究

摘要

目的：研究FRK对脑胶质瘤增殖及细胞周期的影响，并探讨FRK通过作用于“cyclin D1/pRb”信号通路影响胶质瘤细胞周期进程的具体分子机制，为肿瘤的治疗提供可能的靶点与思路。
　　方法：1.应用脂质体2000将FRK质粒转染入人脑胶质瘤U251、U87细胞系中，Western blot(WB)法检测FRK在U251、U87细胞中的过表达情况;2.应用EdU掺入法及平板集落形成实验检测过表达FRK对胶质瘤细胞增殖的影响;3.应用流式细胞术检测过表达FRK对胶质瘤细胞周期的影响;4.应用Westernblot法检测过表达FRK对G1/S期细胞周期相关蛋白cyclin D1、CDK4、pRb、E2F-1表达水平的影响;5.应用Western blot法和免疫荧光法(IF)检测过表达FRK对cyclin D1核转位的影响。
　　结果：1.在胶质瘤U251、U87细胞中过表达FRK蛋白成功;2.过表达FRK能明显抑制胶质瘤细胞的增殖能力。其中，EdU掺入法实验结果显示:与空载体组相比，过表达组处于增殖期的U251、U87细胞（发红色荧光）明显减少(P＜0.01);平板集落形成实验结果显示:过表达FRK组的U251、U87细胞形成的细胞集落数量明显少于对照组（P＜0.01）;3.过表达FRK能使胶质瘤细胞周期阻滞在G1期（P＜0.01）;4.过表达FRK后能够使pRb、E2F1的蛋白水平降低(P＜0.01)，而cyclin D1、CDK4的蛋白水平无明显变化(P＞0.05);5.FRK上调可以使cyclinD1在蛋白核内分布减少、胞浆分布相对增多(P＜0.01)，且在核周FRK与cyclinD1有共定位聚集现象。
　　结论：1.FRK可以抑制胶质瘤细胞的增殖能力，并且将细胞阻滞在G1期;2.FRK对pRb磷酸化水平、E2F1转录因子的释放的调控可能是通过影响cyclin D1的核转位实现的。

目录

研究生个人简介

缩略词表

摘要

前言

材料和方法

1 材料

2 方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述 FRK及Rb信号转导通路与肿瘤增殖、周期的关系

攻读硕士学位期间发表学术论文

临床培训小结

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