利用MAS技术选育耐氟且无鳞毛家蚕新品种及AcMNPV敏感性基因的定位分析

摘要

随着社会经济的发展，空气污染在许多领域都是一个大问题。氟化物是污染空气的重要组成部分，它不仅对人体有害，还污染树木和桑蚕，危害着蚕桑产业。经研究表明家蚕耐氟性主要由显性主效基因（Dtf）控制着，并已利用SSR标记将其定位于家蚕第12连锁群。在我们的试验中菁松亲本是对氟敏感的，当喂食浸渍50 mg/kg NaF的桑叶时就会产生中毒症状，当喂食浸渍100 mg/kg NaF的桑叶时，幼虫全部死亡。而带有抗性基因的个体喂食浸渍200 mg/kg NaF的桑叶时几乎不产生中毒症状。
　　家蚕是鳞翅目的代表，它的翅膀的主要特征是上面覆盖有一层鳞毛。在制种过程中会有大量的鳞毛脱落，飘散在空气中而成微尘，污染工作环境，危害制种工作人员的健康。蚕业学者通过资源考察与采集发现了它的突变体（成虫翅无鳞毛），经遗传分析，发现该性状是由隐性基因（nlw）控制的，并通过分子标记技术将其精细定位。
　　本实验以菁松为轮回亲本，先后与U13和T6品种杂交。首先以菁松品种为母本,T6品系为父本杂交，然后以F1代为母本与U13品系杂交，后代BC1再与菁松母本回交，产生的下一代的BC2代中筛选经济性状最好的雄性个体作为父本与菁松母本回交。在每一次回交后代中，都用与家蚕耐氟性基因Dtf连锁的SSR、STS标记（S1214和 S121201）以及与无鳞毛翅基因（nlw）连锁的分子标记（S1305和cash2p）来检测雄蛾子基因型。如果任一标记表现为菁松的纯合型，则该个体的后代予以淘汰，只留S1214和S121201位点表现为菁松与T6的杂合型并且在 S1305和 cash2p位点表现为菁松和 U13杂合型的个体的后代，采用这种检测方法连续回交至BC6代。之后通过自交得到的群体喂食被200 mg/kg NaF污染的桑叶，然后存活下来个体选择无鳞毛翅且经济性状良好的家蚕被选择出来，自交产生下一代BC6F3。采用分子标记选出那些在Dtf和nlw位点纯合的个体。这样，具有良好性状,高耐氟性并无鳞毛的家蚕产生了。
　　苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographed Californiamultiple nucleopolyhedrovirus)作为杆状病毒的代表种，能够感染许多宿主。研究发现，通过注射接种的方法，重组AcMNPV可以感染部分家蚕品种，且家蚕对AcMNPV的感染性由隐性单基因(susceptible toAcMNPV，sav)控制。以家蚕不感染品种C108和感染品种P50为亲本组配正反交群体，并获得回交群体（P50×C108）×P50和P50×（P50×C108），记作BC1F和BC1M。在家蚕饲养过程中将分离群体的五龄幼虫注射含有GFP标记的重组AcMNPV病毒，并喂养浸渍有抗生素的桑叶3天后用荧光显微镜区观察。有绿色荧光的个体为感染个体，没有绿色荧光的个体为不感染个体。根据家蚕基因组信息，设计STS分子标记对sav基因进行定位分析，将sav基因定位在第3连锁群，绘制的遗传连锁图的遗传距离为48.7cM，sav基因位于37.6cM处，T0399和T03147标记与sav基因的距离最近，分别是5.1和0.4cM。

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第1章 绪 论

1.1 家蚕耐氟性的研究

1.2 家蚕无鳞毛翅的研究

1.3 家蚕经济性状的相关研究

1.4 AcMNPV感染家蚕的研究

1.5 分子标记及其在家蚕中的应用

1.6 家蚕分子标记辅助育种研究

1.7课题研究内容与研究方法

第 2 章 选育耐氟，翅无鳞毛且经济性状良好的家蚕新品种

2.1 材料和方法

2.2 实验方法

2.3实验结果和分析

2.4 讨论

2.5 本章小结

第3章 家蚕对AcMNPV感染基因的定位分析

3.1引言

3.2 材料和方法

3.3 结果和分析

3.4 讨论

3.5 本章总结

参考文献

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