音猬因子复合骨髓间充质干细胞—支架复合物修复大鼠股骨缺损

摘要

[目的]
　　SD大鼠骨髓间充质干细胞(Marrowmesenchymalstemcells，MSCs)与纳米晶胶原基骨(nano-hydroxyapatite/collagen，nHAC)、音猬因子(sonichedgehog，Shh)形成生物因子-细胞-支架复合物，植入SD大鼠股骨缺损处，比较修复股骨缺损的效果，初步探讨治疗骨缺损的组织工程学方法。
　　[方法]
　　将30只SD大鼠按照随机数字表法分三组制成股骨缺损模型:A组，骨缺损处不植植入物;B组，植入MSCs/nHAC复合物;C组，植入MSCs/Shh-nHAC复合物。SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)离体培养、纯化、鉴定、扩增后在等同于细胞培养的条件下种植于shh-nHAC支架及nHAC支架上，将该复合物按实验分组分别移植SD大鼠股骨干5mm节段性骨缺损，通过大体观察、X线放射学、组织学对比A组、B组与C组骨缺损修复情况。
　　[结果]
　　SD大鼠MSCs在体外复合培养14天，经电镜扫描，证实有细胞生长。A组术后6周、12周时骨缺损均较明显;B组术后6周时X线可见云雾状的新生骨痂，12周时缺损区可见大量骨痂，未见塑形;C组术后6周时X线见MSCs/Shh-nHAC支架降解及少量骨组织形成，骨缺损处间隙模糊;12周时X线可见有连续骨痂，植入物被骨小梁代替。术后6、12周放射学检查评价新骨生成各组间有显著差异(P＜0.05)。术后组织学检查新骨生成速度、生成量均有显著差异(P＜0.05)。
　　[结论]
　　MSCs是骨组织工程中适宜的种子细胞。Shh-nHAC、nHAC支架能够与SD大鼠MSCs体外复合培养，移植入异体SD大鼠后未见明显免疫排斥反应，是可以选择的新型细胞载体。MSCs/Shh-nHAC复合物修复SD大鼠股骨缺损能够加速新骨形成，修复效果优于单纯MSCs/nHAC复合物植入组。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

第二章 实验材料

2．1 实验动物

2．2 主要试剂和仪器

第三章 实验方法

3．1 各试剂配制方法

3．2 SD大鼠MSCs的获得、成骨诱导及传代

3．3 Shh-nHAC的制备

3．4 Ⅰ型胶原免疫荧光染色

3．5 构建组织工程骨及扫描电镜观察

3．6 骨缺损模型制备与修复

3．7 观测指标

3．7．1 大体观察

3．7．2 X线检查及放射学评分

3．7．3 组织学检查

3．8 统计学方法

第四章 实验结果

4．1 倒置显微镜下观察MSCs

4．2 Ⅰ型胶原免疫荧光染色

4．3 MSCs与nHAC、Shh-nHAC复合培养情况

4．4 实验动物一般情况及标本大体观察

4．5 X线检查及放射学评分

4．6 组织学观察

第五章讨论

5．1 种子细胞的选择

5．2 支架材料的选择

5．2．1 概述

5．2．2 分类

5．3 组织工程骨的构建

5．4 细胞因子的选择

第六章 全文总结

参考文献

综述 骨髓间充质细胞复合支架材料构建组织工程骨的研究进展

注释表

致谢