Ⅰ：水飞蓟宾纯化及水飞蓟素固体分散体药效学研究；Ⅱ：内生真菌JJ18接种江滩土壤灭螺活性初步研究

摘要

本论文包括两部分内容：
　　 Ⅰ水飞蓟宾纯化及水飞蓟素固体分散体药效学研究
　　 水飞蓟素(Silymarin)是菊科植物水飞蓟(slybum marianum L.Gaertn)，果实的药用有效成分的总提取物，其主要成分为水飞蓟宾(silybin)、异水飞蓟宾(isosilybin)、水飞蓟宁(silydianin)、水飞蓟亭(silychristin)。水飞蓟素作为传统的保肝药物，因其确切的疗效和极低的毒性，在肝病治疗领域得到广泛的应用，已积累了30多年的临床使用经验。为了提高水飞蓟素的生物利用度，本论文将其制备成固体分散体及进行重结晶纯化研究。主要研究内容及结论如下：
　　 (1)将水飞蓟籽壳仁分离，用热回流法对水飞蓟壳中的水飞蓟素进行热回流提取，单因素试验优化最佳提取条件为：乙酸乙酯与水飞蓟壳的料液比=1:6，提取时间为8 h，提取温度为78℃。此条件下，热回流提取一次，水飞蓟素得率为4.69％，热回流提取四次，水飞蓟素得率为6.18％。
　　 (2)通过溶剂法成功的制备了不同比例的水飞蓟素-PVP固体分散体，经表观溶解度及溶出度试验考察，选取1：7为最佳比例。此时固体分散体中水飞蓟素在水中的表观溶解度是水飞蓟素的62倍，而在人工胃液中溶出20 min后，其溶出率超过80％。
　　 (3)利用CCl4致小鼠急性肝损伤模型，检测肝系数及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量，并与片剂益肝灵相比较，用Hism函数对各组进行综合考察。结果显示，当水飞蓟素与PVP的比例为1：7，固体分散体对CCl4致急性肝损伤小鼠的各个指标有明显的改善作用，且固体分散体高剂量组药效与空白组最接近，说明其效果优于片剂益肝灵。
　　 (4)将水飞蓟素作为原料，于80℃溶解于乙醇中，4℃冰箱中放置过夜，进行水飞蓟宾的重结晶试验。综合水飞蓟宾纯度及收率因素考虑，选择70％乙醇为重结晶溶剂。此时，水飞蓟宾的含量可达97％以上。
　　 Ⅱ内生真菌JJ18接种江滩土壤灭螺活性初步研究
　　 血吸虫病是一种古老的地方性寄生虫病，严重危害人类健康。钉螺是血吸虫唯一中间宿主，消灭钉螺具有重要意义。金钱松内生真菌JJ18为本课题组从金钱松Pseudolarix kaempferi Gord茎中分离到的一株具有良好的杀灭钉螺活性的菌株。为了进一步研究JJ18现场杀灭钉螺的可行性，本研究在实验室中将JJ18接种到钉螺孳生的江滩土壤中进行培养，并对该土壤浸出液进行发酵，通过检测该发酵液的杀钉螺活性来判断JJ18接种土壤后的生存情况，旨在探索一条新的灭螺路线。本论文主要研究内容及结论如下：
　　 (1)将内生真菌JJ18进行液体发酵，发酵产物经冷冻干燥、正丁醇提取，结果发现胞内产物的正丁醇提取物无抑菌效果，而胞外产物的正丁醇提取物对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的MIC分别为0.9 mg/mL和1.35 mg/mL。
　　 (2)将内生真菌JJ18接入钉螺孳生的江滩土壤中，实验室条件下放置一段时间，选取不同的时间点用无菌水洗脱该土壤中的微生物，并通过考察该土壤浸出液的发酵产物对钉螺的杀灭作用，从而判断内生真菌JJ18接入该土壤后的存活情况。通过上述JJ18接种江滩土壤后的灭螺活性时效关系试验，初步判定JJ18在本试验条件下，可以在江滩土壤中至少生存30天。
　　 (3)通过卤虫急性毒性试验，发现与JJ18接入PDA相比，JJ18接种灭菌2h、未灭菌土壤后，其洗脱液的发酵产物急性毒性有所降低，从而肯定接种的效果。

目录

文摘

英文文摘

声明

Ⅰ水飞蓟宾纯化及水飞蓟素固体分散体药效学研究

第一章绪论

1.1水飞蓟的研究概况

1.2水飞蓟素的药理作用

1.3水飞蓟素的制剂概况

1.4水飞蓟宾的提取与纯化研究

1.5研究目的及内容

第二章水飞蓟素提取工艺的研究

2.1仪器、试剂与材料

2.2试验方法

2.3试验结果与讨论

2.4本章小结

第三章水飞蓟素固体分散体的制备

3.1仪器与试剂

3.2试验方法

3.3试验结果与讨论

3.4本章小结

第四章水飞蓟素固体分散体对CCI4致小鼠急性肝损伤的保护作用

4.1试验动物、仪器与试剂

4.2试验方法

4.3试验结果与讨论

4.4本章小结

第五章水飞蓟宾重结晶纯化研究

5.1仪器、试剂与材料

5.2试验方法

5.3试验结果与讨论

5.4本章小结

第六章主要结论与展望

6.1主要结论

6.2工作不足与展望

参考文献

Ⅱ内生真菌JJ18接种江滩土壤灭螺活性初步研究

第一章绪论

1.1血吸虫病

1.2灭螺药物的研究进展

1.3内生真菌

1.4金钱松的研究概况

1.5研究意义及内容

第二章内生真菌JJ18的活性及抑菌试验

2.1仪器、试剂与材料

2.2试验方法

2.3试验结果与讨论

2.4本章小结

第三章JJ18接种江滩土壤灭螺活性及急性毒性初步研究

3.1仪器、试剂与材料

3.2试验方法

3.3试验结果与讨论

3.4本章小结

第四章主要结论与展望

4.1主要结论

4.2工作不足与展望

致 谢

参考文献

攻读硕士期间发表论文