核转录因子NF-κB和细胞间粘附分子ICAM-1在结肠癌中的表达及临床意义

摘要

背景:
　　 结肠癌是胃肠道中常见的恶性肿瘤,近20年来,结肠癌、患病率、发病率及死亡率呈上升趋势。从病因上看,超过半数的结肠癌来自于腺瘤癌变；从形态学上看,可以见到从增生、腺瘤直至癌变的各阶段以及相应的染色体改变。随分子生物学技术的发展,同时存在的分子事件基因表达亦渐被认识,从中明确肿瘤的发生、发展是一个多步骤、多阶段及多基因参与的疾病。作为调控多种凋亡基因表达的核转录因子(NF-κB)的异常激活,可以促进肿瘤细胞的增殖、发生和发展,特别是在肿瘤的浸润、转移过程中发挥着一定作用。参与肿瘤血管形成的因子之一的细胞间粘附分子(ICAM-1)上有NF-κB结合位点,NF-κB可与ICAM-1相结合,激活ICAM-1,产生免疫抑制和降低自然杀伤细胞的杀细胞毒性,有助于异位组织逃避机体免疫系统和自然杀伤细胞的杀伤,促使异位组织侵入后的血管生成,促进了肿瘤细胞的迁移、浸润。
　　 目的:
　　 通过检测NF-κB、ICAM-1在结肠癌患者中的表达,旨在了解两者的相关性及在结肠癌的浸润、转移中的作用。为早期发现已存在的亚临床转移灶,对可能出现的转移进行预测并进行多学科的合理综合治疗提供理论依据；同时,根据临床、病理以及分子生物学的指标进行预后和治疗效果的预测。
　　 方法:
　　 采用ELISA法检测108例结肠癌患者血清NF-κB、ICAM-1含量,与50例正常对照组作比较。采用免疫组化SP法检测结肠癌组织和癌旁正常组织组织中NF-κB、ICAM-1的表达,分析NF-κB、ICAM-1结肠癌组织中的表达。应用RT-PCR、Western blot检测肿瘤及其癌旁组织中NF-κB、ICAM-1 mRNA及其蛋白的表达,以及与临床病理因素(性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤分化程度、肿瘤类型、肿瘤浸润深度、肿瘤是否转移、肿瘤分期等)之间的关系。
　　 结果
　　 1.血清检测:在结肠癌患者中,血清NF-κB、ICAM-1含量,明显高于正常对照组p<0.001)。
　　 2.免疫组化:NF-κB定位于结肠癌肿瘤细胞的胞浆和胞核,可见黄色或棕黄色颗粒,ICAM-1在结肠癌肿瘤细胞的胞浆或胞膜内均有棕黄色颗粒沉积。
　　 3.NF-κB和ICAM-1 mRNA及其蛋白表达水平:随着肿瘤组织学分型的不同、浸润深度的不同、是否发生淋巴结转移及Dukes分期的不同而不同,其中,在粘液癌(印戒细胞癌、粘液腺癌)、浸及浆膜、有淋巴结转移及处于Dukes C+D期的结肠癌中,NF-κB和ICAM-1 mRNA及其蛋白表达明显增高(P<0.001或<0.05)；而NF-κB和ICAM-1 mRNA及其蛋白表达水平与性别、年龄、高纤维素饮食、嗜酒及肿瘤部位、大小和分化程度无关(P>0.05)。
　　 4.NF-κB和ICAM-1在结肠癌组织中高表达,应用McNemar检验,P=0.557说明两种检验方法一致,kappa=0.401说明两个指标中度一致性。这表明NF-κB和ICAM-1均可作为结肠癌筛查指标。
　　 5.在结肠癌组织中,当NF-κB mRNA与其蛋白表达增多时,则ICAM-1mRNA与其蛋白表达则相应的升高,两者之间可能存在着正相关(r=0.549,r=0.568,P<0.05)。
　　 结论
　　 NF-κB和ICAM-1的表达与结肠癌浸润、转移密切相关；检测NF-κB和ICAM-1对结肠癌的诊疗有一定的价值。

目录

文摘

英文文摘

第一章 绪论

1.1 前言

1.2 选题的意义、研究内容和技术路线

1.2.1 选题的意义

1.2.2 研究内容

1.2.3 技术路线

第二章 核转录因子NF-KB和细胞间粘附分子ICAM-1在结肠癌中的表达及临床意义

2.1 材料

2.1.1 临床资料

2.1.2 主要试剂

2.1.3 主要仪器设备

2.2 方法

2.2.1 血清NF-κB的检测-ELISA法

2.2.2 血清ICAM-1的检测-ELISA法

2.2.3 病理切片NF-κB表达的检测-SP法

2.2.4 病理切片ICAM-1表达的检测-SP法

2.2.5 NF-κB、ICAM-1 mRNA表达-半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法

2.2.6 NF-κB、ICAM-1蛋白的检测-Western-blot法

2.2.7 统计分析

2.3 结果

2.3.1 结肠癌患者和正常对照组中血清NF-κB、ICAM-1含量的检测

2.3.2 NF-κB和ICAM-1在结肠癌组织和癌旁正常粘膜组织的表达

2.3.3 结肠癌组织NF-κB P65 mRNA和蛋白表达指数与人口统计学资料和临床病理因素间的关系

2.3.4 结肠癌组织ICAM-1 mRNA和蛋白表达指数与人口统计学资料和临床病理因素间的关系

2.3.5 NF-κB和ICAM-1在结肠癌筛查中的作用及其相关性

2.4 讨论

2.5 参考文献

第三章 研究总结与展望

3.1 研究总结

3.1.1 结肠癌患者血清NF-κB、ICAM-1含量,明显高于正常对照组

3.1.2 NF-κB和ICAM-1 mRNA及其蛋白表达水平随着肿瘤组织学分型的不同、浸润深度的不同、是否发生淋巴结转移及Dukes分期的不同而不同

3.1.3 在粘液癌(印戒细胞癌、粘液腺癌)、浸及浆膜、有淋巴结转移及处于Dukes C+D期的结肠癌中,NF-κB和ICAM-1 mRNA及其蛋白表达明显增高

3.1.4 NF-kB和ICAM-1 mRNA及其蛋白表达水平与性别、年龄、高纤维素饮食、嗜酒及肿瘤部位、大小和分化程度无关

3.1.5 NF-κB和ICAM-1均可用来检测和筛查结肠癌

3.1.6 NF-κB和ICAM-1在结肠癌表达中的相关性

3.2 研究展望

文献综述

参考文献

英文缩写索引

致谢

攻读硕士期间发表的论文