保罗样激酶1与p53在食管鳞癌中的表达及相关性研究

摘要

目的：探讨保罗样激酶1(PLK1)和p53蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及其临床意义。构建PLK1—shRNA重组质粒，并转染食管鳞癌Eca—109细胞株，探讨重组质粒对Eca—109细胞株PLK1mRNA及蛋白的抑制作用，进一步对p53mRNA及蛋白表达的影响。
　　 方法：采用免疫组织化学法分别检测87例食管鳞状细胞癌、53例癌旁组织及42例正常食管黏膜组织中PLK1及p53蛋白的表达，并分析两者的表达水平与临床病理因素的关系。构建靶向人PLK1基因的RNA干扰表达质粒(PLK1—shRNA)，将该干扰质粒转染到人食管鳞癌细胞Eca—109中，用Real—time PCR分析检测PLK1基因和p53基因mRNA表达水平的变化，采用Western blot技术分析检测PLK1基因和p53基因蛋白表达水平的变化。
　　 结果：(1)PLK1蛋白在食管鳞状细胞癌、癌旁组织及正常黏膜组织中的阳性表达率分别为57．5％、50．9％和26．2％；p53蛋白的阳性表达率分别为48．3％、52．8％和23．8％。食管鳞癌组织PLK1、p53阳性表达率与正常黏膜组织比较差异均有统计学意义(x2分别为11．119和7．047，P<0．05)，癌旁组织PLK1、p53阳性表达率与正常黏膜组织比较差异均有统计学意义(x2分别为5．982和8．223，P<0．05)，两者在食管鳞癌组织与癌旁组织比较差异均无统计学意义(x2分别为0．567和0．273，P>0．05)。(2)食管鳞癌组织中PLK1和p53的蛋白表达与淋巴结转移及TNM分期密切有关(P<0．05)，而PLK1的蛋白表达还与肿瘤浸润深度有关(P<0．01)。(3)PLK1和p53在食管鳞状细胞癌组织中的表达呈负相关(r=—0．286，P<0．01)。(4)酶切鉴定和DNA测序分析显示，PLK1靶向RNA干扰重组质粒构建成功。(5)转染后48h和72h，转染效率分别是65％和55％。(6)Real—time PCR结果显示，转染RNA干扰表达质粒(PLK1—shRNA)后，PLK1—shRNA组Eca—109细胞48h、72h较转染液对照组的PLK1基因mRNA表达分别降低了72．8％和58．5％(P<0．05)；PLK1—shRNA组Eca—109细胞48h、72h较转染液对照组的p53基因mRNA表达分别升高了61．3％和72．9％(P<0．05)。(7)Western blot结果显示，转染RNA干扰表达质粒(PLK1—shRNA)后，PLK1—shRNA组Eca—109细胞48h、72h较转染液对照组的PLK1基因蛋白表达分别降低了67．6％和56．1％(P<0．05)；PLK1—shRNA组Eca—109细胞48h、72h较转染液对照组的p53基因蛋白表达分别升高了46．6％和54．1％(P<0．05)。
　　 结论：PLK1和p53蛋白表达与食管鳞状细胞癌发生发展密切相关，联合检测PLK1和p53蛋白对食管鳞癌的预后判断具有重要意义。干扰重组质粒PLK1—shRNA能有效抑制人食管鳞癌Eca—109细胞株PLK1mRNA和蛋白的表达，从而有效地升高p53mRNA和蛋白的表达，说明PLK1基因抑制p53基因在Eca—109细胞中的表达，为进一步研究以PLK1为靶点的抗肿瘤治疗奠定了基础。

目录

文摘

英文文摘

第一章 绪论

1.1 食管鳞癌简介

1.2 PLK1基因概述

1.3 p53基因概述

1.4 RNAi研究现状

1.4.1 RNAi现象的发现

1.4.2 RNAi的作用机制

1.4.3 RNAi的应用

第二章 PLK1与p53在食管鳞癌中的表达及其临床意义

2.1 材料与方法

2.1.1 材料

2.1.2 主要试剂

2.1.3 EliVisionTM plus免疫组化染色步骤

2.1.4 免疫组化评分

2.1.5 统计学分析

2.2 实验结果

2.2.1 PLK1蛋白和p53蛋白在食管不同组织中的表达

2.2.2 PLK1蛋白和p53蛋白与食管鳞癌临床生物学行为的关系

2.2.3 PLK1蛋白和p53蛋白在食管鳞癌中表达的相关性分析

2.3 讨论

第三章 PLK1特异性shRNA真核质粒的构建及鉴定

3.1 材料与方法

3.1.1 材料

3.1.2 实验方法与步骤

3.2 实验结果

3.2.1 质粒的鉴定

3.2.2 质粒测序结果

3.3 讨论

第四章 PLK1与p53在食管鳞癌细胞中的表达及相关性研究

4.1 材料与方法

4.1.1 材料

4.1.2 实验方法和步骤

4.2 实验结果

4.2.1 质粒转染Eca-109细胞结果

4.2.2 PLK1和p53的Real-time PCR检测结果

4.2.3 PLK1和p53的Western blot检测结果

4.3 讨论

第五章 主要结论

致谢

参考文献

英文缩写索引

综述

参考文献

硕士期间发表的论文