蛋白质-多糖复合纳米纤维膜用于构建组织工程全层皮肤的实验研究

摘要

第一部分蛋白质/多糖和蛋白质—多糖/P(LLA—CL)复合纳米纤维膜用于皮肤缺损修复的实验研究
　　 目的：通过动物实验的方法评价丝素蛋白/壳聚糖(两者比例为80：20)、丝素蛋白/壳聚糖(两者比例为50：50)、丝素蛋白—壳聚糖/P(LLA—CL)(两者比例为25：75)、胶原蛋白/壳聚糖(两者比例为80：20)、明胶/透明质酸(两者比例为90：10)复合纳米纤维膜对于SD大鼠背部全层皮肤缺损创面修复的作用。
　　 方法：将上述五种复合纳米纤维膜材料分成五组，并将其分成两部分完成，第一部分一、二、三组，第二部分四、五、六组进行实验，实验组用相应的复合纳米纤维膜覆盖在雌性SD大鼠皮肤缺损创面，外被油纱和纱布敷料；每组各用大鼠15只；对照组仅覆盖油纱和纱布敷料，用大鼠15只。实验组和对照组大鼠背部皮肤缺损的面积均为2×1．5cm2；第一部分于术后第3、7、21天，第二部分于术后第3、7、14天，每组各随机取5只SD大鼠处死，观察SD大鼠大体情况、创面情况，并取创缘与正常创面组织4％甲醛固定，行石蜡包埋切片H—E染色光镜下对比观察。
　　 结果：与对照组相比，实验组创面修复情况较对照组好，其中尤以丝素蛋白/壳聚糖(80：20)、丝素蛋白—壳聚糖/P(LLA—CL)(25：75)和胶原蛋白．壳聚糖(80：20)复合生物材料的促创伤修复作用更明显。
　　 结论：丝素蛋白/壳聚糖(80：20)、丝素蛋白—壳聚糖/P(LLA—CL)(25：75)和胶原蛋白—壳聚糖(80：20)复合纳米纤维膜较普通生物敷料和其他两组生物材料能更好的促进创伤修复、愈合，有着较好的科研和临床应用前景。
　　 第二部分蛋白质—多糖复合纳米纤维膜用于构建组织工程全层皮肤的实验研究
　　 基于生物可降解复合纳米纤维材料而设计的共培养体系制作的组织工程皮肤已有报道。在体外，对细胞与胶原蛋白—壳聚糖复合纳米纤维材料共培养后，并对纳米生物材料进行观察和性能评估的实验也已有报道。我们现用这种共培养体系将SD大鼠皮肤角质细胞和皮肤成纤维细胞与胶原蛋白—壳聚糖(80：20)复合纳米纤维材料共培养模拟全层皮肤结构建立多层组织工程复合物。首先，分离培养SD大鼠皮肤角质细胞和皮肤成纤维细胞，并在倒置显微镜下对细胞的形态进行观察；其次，将培养至三至四代的SD大鼠皮肤细胞与复合生物材料共培养；培养一周后，通过扫描电镜观察生物材料以及细胞在材料上面的形态；通过MTT试验评估细胞增殖与细胞在生物材料上面的增殖特性；用免疫细胞化学的方法评估细胞以及细胞在生物材料上的生长和形态。以合成材料PLGA为对照组，处理方法与胶原蛋白—壳聚糖复合材料相同。通过与对照组相比，SD大鼠皮肤成纤维细胞和角质形成细胞在实验组材料上生长良好，表明有其良好的生物相容性，适合于作为一种组织工程支架材料在生物医学工程领域应用。

目录

文摘

英文文摘

第一部分 蛋白质/多糖和蛋白质-多糖/P(LLA-CL)复合纳米纤维膜用于全层皮肤缺损修复的实验研究

1 、实验立题依据

1.1 理想的生物工程敷料应具备的特点

1.2 复合生物材料较单一生物材料更具优势

2 、动物实验设计

2.1 本次实验的实验目的:

2.2 本次实验的实验步骤:

3 、实验过程

3.1 材料与方法

4 、实验结果

4.1 第3天各组实验动物创面大体情况及创面组织I-I-E切片染色情况

4.2 术后7天各组实验动物创面大体情况及创面组织H-E切片染色结果6

4.3 术后14天各组实验动物创面大体情况及修复组织I-I-E切片染色结果

4.4 术后21天各组实验动物创面大体情况及修复组织H-E切片染色结果

5 、实验结论与讨论

6 、参考文献

第二部分 胶原蛋白-壳聚糖(80:20)复合纳米纤维膜用于组织工程皮肤构建的实验研究

1 、实验立题依据

1.1 胶原蛋白壳聚糖复合纳米纤维膜的研究进展

1.2 聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)在皮肤组织工程中的应用

2、实验设计

3 、实验过程

3.1 种子细胞的分离、培养与鉴定

3.2 复合生物材料实验前准备

3.3 组织工程皮肤的构建

4 、实验结果与讨论

4.1 种子细胞增殖活性评估和细胞鉴定

4.2 种子细胞-生物材料复合膜电镜图片

4.3 种子细胞-复合生物材料复合物的冰冻切片细胞免疫化学荧光图片

5 、实验结论与展望

6 、参考文献

附:攻读学位期间发表的学术论文目录

致谢