半夏、夏枯草镇静催眠物质基础和作用机制研究

摘要

失眠是临床上常见的一种疾病，调查显示，全世界50％～60％的成年人患有不同程度的睡眠障碍，我国失眠的发生率高达40％。目前对失眠的治疗主要依靠镇静催眠药物，镇静催眠药物按照来源不同分为化学合成类、内源性物质和中药类三类，其中化学合成类镇静催眠药对神经系统有广泛的抑制作用，长期服用会产生严重的副作用；内源性物质对失眠的治疗效果好且副作用极小，但是提取难度大，耗资甚巨，应用受到限制。研究表明，许多中药具有良好的镇静催眠作用且毒副作用小，因此，镇静催眠中药已成为当前研究的热点之一。
　　 半夏和夏枯草是治疗失眠的传统中药，现代临床半夏、夏枯草合用治疗失眠也取得了良好效果。本文对半夏和夏枯草镇静催眠的活性部位、作用机制以及半夏、夏枯草合用的机理进行研究；并对半夏、夏枯草镇静催眠活性部位中的化学成分进行分离、分析和镇静催眠活性测试，探讨其镇静催眠的物质基础。
　　 主要研究结果如下：
　　 1.以药效学为主要指标，采用行为药理学实验方法，对半夏不同溶剂提取部位和夏枯草不同浓度乙醇提取物的镇静催眠活性进行测试。结果表明，半夏95％乙醇提取部位和60％乙醇提取部位对小鼠活动具有明显的抑制作用，对戊巴比妥小鼠睡眠有明显的协同作用，能明显增加阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的入睡只数，显著缩短阈上剂量戊巴比妥小鼠的睡眠潜伏期、延长其睡眠时间，且60％乙醇提取部位的活性明显优于95％乙醇提取部位，而石油醚提取部位、30％乙醇提取部位和水提取部位对小鼠自主活动和戊巴比妥小鼠睡眠无显著影响；夏枯草80％、85％、90％和95％乙醇提取物均具有镇静催眠作用，不仅明显减少了小鼠的自主活动次数，而且对戊巴比妥钠小鼠睡眠表现出明显的协同作用，能明显增加阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的入睡只数，显著缩短阈上剂量戊巴比妥小鼠的睡眠潜伏期、延长其睡眠时间，其中90％乙醇提取物的镇静催眠活性最优。此外，半夏60％乙醇提取部位在24 g/kg和48 g/kg剂量下单独使用能使小鼠入睡，延长尼可刹米致惊厥的死亡潜伏期，降低死亡率；夏枯草90％乙醇提取物在40 g/kg和80 g/kg剂量下单独使用能使小鼠入睡，延长尼可刹米致惊厥的死亡潜伏期，降低死亡率。综上，60％乙醇提取部位为半夏镇静催眠的主要活性部位，夏枯草镇静催眠活性部位提取最佳乙醇浓度为90％。
　　 2.采用行为药理学实验方法，探讨了半夏60％乙醇提取物和夏枯草90％乙醇提取物的镇静催眠作用机制。考察了GABA合成酶抑制剂L-苹果酸和选择性苯二氮卓受体拮抗剂氟马西尼对半夏、夏枯草镇静催眠活性的影响，结果表明，L-MA和Flu能显著拮抗半夏60％乙醇提取物对戊巴比妥小鼠睡眠的协同作用，不仅减少了阈下剂量戊巴比妥小鼠的入睡只数，而且延长了阈上剂量戊巴比妥小鼠的睡眠潜伏期、缩短其睡眠时间；而对夏枯草90％乙醇提取物的催眠作用无显著性影响，说明半夏60％乙醇提取物的镇静催眠活性和GABA能系统有关，夏枯草90％乙醇提取物的镇静催眠活性和GABA能系统不一定有关。考察了5-HT前体5-HTP和色氨酸羟化酶抑制剂PCPA对半夏、夏枯草催眠作用的影响，结果表明夏枯草90％乙醇提取物对5-HTP有协同作用，能明显增加阈下剂量戊巴比妥钠小鼠入睡数目，显著延长阈上剂量戊巴比妥钠小鼠的睡眠时间，且能校正PCPA失眠模型的睡眠；而半夏对5-HTP的协同作用和PCPA失眠模型小鼠的睡眠影响无显著性意义，说明夏枯草的镇静催眠作用和5-HT能系统有关，半夏的镇静催眠活性和5-HT能系统不一定有关。
　　 3.以药效学为指标，对半夏和夏枯草合用的镇静催眠作用进行研究，确定半夏、夏枯草合用的最佳配伍。通过协同戊巴比妥小鼠睡眠实验，比较了半夏、夏枯草乙醇提取物和传统水提物单用、合用以及共煎的镇静催眠药效，结果表明，半夏、夏枯草合用具有协同作用，其中醇提物合用的效果最优；考察了半夏和夏枯草不同配比下的镇静催眠作用，结果表明，半夏-夏枯草1:1合用比例时的镇静催眠作用最显著；因此半夏、夏枯草合用的最佳配伍为醇提物、1:1合用。
　　 4.对半夏60％乙醇提取物和夏枯草90％乙醇提取物中的化学成分进行分离、分析，并对其镇静催眠活性进行测试。采用反复硅胶柱色谱法对夏枯草90％乙醇提取物中的化学成分进行分离，并通过理化性质测定和核磁共振对其结构进行分析，结果表明，分离出了15种化合物，依次为β-谷甾醇、齐墩果酸、熊果酸、槲皮素、木犀草素、Camaldulin、α-菠菜甾醇、p-香豆素、金丝桃苷、芦丁、肉桂酸、原儿茶酸、绿原酸、阿魏酸和咖啡酸，其中Camaldulin为首次从该植物中分离得到；通过葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱色谱和制备HPLC法从半夏60％乙醇提取物中分离得到10种化合物，经核磁共振分析，依次为鸟嘌呤核苷、次黄嘌呤核苷、胸苷、尿嘧啶、尿嘧啶核苷、β-胡萝卜苷、黄嘌呤核苷、β-谷甾醇、棕榈酸和麻黄碱；通过协同戊巴比妥小鼠睡眠实验对分离所得各化合物的镇静催眠活性进行测定，结果表明，半夏60％乙醇提取物中的化合物次黄嘌呤核苷和尿嘧啶核苷及夏枯草90％乙醇提取物中的化合物熊果酸、槲皮素和Camaldulin具有确切的镇静催眠活性，分别为半夏和夏枯草的镇静催眠活性成分。