桂苓神术汤利尿药效物质基础及作用机制初步研究

摘要

孟河医派是源出江苏常州孟河的一大地域性医学流派，其高深的学术造诣，丰富的临床经验，在中医界享有“吴中医学甲天下，孟河名医冠吴中”的美誉。桂苓神术汤为孟河医派多年临床用治疗脾虚水泛证的有效方剂，该方疗效确切，应用广泛。但目前关于该方的相关药理学研究尚未见报道，其药效物质基础及作用机制亦不明确。本论文以中医药理论为指导，按照中医药现代化的基本思路，采用现代药理方法筛选了桂苓神术汤的利尿药效部位，初步研究了其利尿作用机制；并应用现代分析技术对桂苓神术汤药效部位进行了成分分析，建立了药效部位指纹图谱并分析了与组方药味的相关性；运用质谱学方法分析了药效部位的主要成分，为该方更好的临床应用和进一步开发提供基础研究。主要研究内容和结论如下：
　　(1)采用盐水负荷大鼠模型研究了桂苓神术汤的利尿作用并筛选了其利尿活性部位。研究结果表明，桂苓神术汤对盐水负荷模型大鼠具有较显著的利尿作用。阳性药物呋塞米的利尿作用主要发生在给药后1～2 h，而桂苓神术汤的利尿作用则缓和而持久，具体表现在1～8 h。与苓桂术甘汤比较，桂苓神术汤的利尿作用明显优于苓桂术甘汤。桂苓神术汤的乙酸乙酯部位和萃余部位为其主要的利尿活性部位。
　　(2)初步研究了桂苓神术汤及利尿活性部位的利尿作用机制。采用电解质分析仪对盐水负荷模型大鼠尿中Na+、K+、Cl-的含量进行了分析。研究结果表明，桂苓神术汤及其利尿活性部位能显著增加大鼠尿中K+的排出量，但对Na+、Cl-无显著影响，其利尿作用机制可能为增加大鼠尿液中K+的排泄。阳性药物呋塞米则能显著增加大鼠尿中的Na+、K+、Cl-的排出量。与呋塞米相比，桂苓神术汤对电解质的影响相对较小。
　　(3)建立了桂苓神术汤乙酸乙酯部位的高效液相色谱指纹图谱。最佳色谱条件为：色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5μm)，检测波长278 nm，柱温30℃，流速1 mL/min，流动相为乙腈-水(0.1％醋酸)，进样量为20μL，梯度洗脱程序为0～5 min乙腈为0～5％，5～10 min乙腈为5％～11％，10～40 min乙腈为11％～40％，40～45 min乙腈为40％～58％，45～60 min乙腈为58％～98％，60～65 min乙腈为98％～98％，记录65 min。该方法准确、简便，具有良好的重复性和稳定性。通过对不同提取批次桂苓神术汤乙酸乙酯部位指纹图谱研究发现有18个主要共有峰，与对照图谱的相似度均大于0.90，所建立的桂苓神术汤乙酸乙酯部位指纹图谱技术指标稳定，重现性好。分析了桂苓神术汤乙酸乙酯部位与组方药味的相关性。桂苓神术汤乙酸乙酯部位HPLC指纹图谱共有峰中，1号峰主要来源于苡仁，2、8号峰主要来源于厚朴，3号峰主要来源于白术和茅术，4、14号峰主要来源于茯苓，5、6、7号峰主要来源于砂仁，9号峰主要来源于白术，10、11号峰主要来源于桂枝，12、13、17号峰主要来源于陈皮，15号峰主要来源于半夏，16、18号峰未能归属。
　　(4)采用HPLC-DAD-ESI-MS对桂苓神术汤利尿活性部位--乙酸乙酯部位的主要化学成分进行了分析。结果表明，桂苓神术汤乙酸乙酯部位中的部分主要化学成分为没食子酸、去氢土莫酸、Obovatol、β-桉叶油醇、肉桂醇乙酸酯、3-(2-甲氧基苯基)-2-丙烯醛、柚皮苷、橙皮苷、茯苓酸、橙黄酮等，分别主要来源于桂枝、茯苓、白术、茅术、陈皮、厚朴等。

目录

文摘

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课题来源

第一章 绪论

1.1 桂苓神术汤方药研究概况

1.1.1 桂苓神术汤方源考证

1.1.2 桂苓神术汤组成药味功效

1.2 桂苓神术汤中各单味药化学成分和药理作用研究进展

1.2.1 桂枝化学成分和药理作用研究进展

1.2.2 茯苓化学成分和药理作用研究进展

1.2.3 白术化学成分和药理作用研究进展

1.2.4 茅术化学成分和药理作用研究进展

1.2.5 苡仁化学成分和药理作用研究进展

1.2.6 广皮化学成分和药理作用研究进展

1.2.7 半夏化学成分和药理作用研究进展

1.2.8 厚朴化学成分和药理作用研究进展

1.2.9 砂仁化学成分和药理作用研究进展

1.2.10 姜化学成分和药理作用研究进展

1.3 液相色谱-质谱技术在中药分析中的应用现状

1.3.1 在中药成分分析方面的应用

1.3.2 在中药质量控制方面的应用

1.3.3 在中药代谢方面的应用

1.4 本课题的立题背景和意义

1.5 本论文研究的主要内容

第二章 桂苓神术汤利尿作用及活性部位筛选

2.1 仪器与材料

2.1.1 仪器

2.1.2 动物

2.1.3 试剂

2.1.4 药材

2.2 实验方法

2.2.1 桂苓神术汤水提液的制备

2.2.2 桂苓神术汤不同极性部位的制备

2.2.3 动物的筛选

2.2.4 桂苓神术汤对盐水负荷大鼠的利尿作用

2.2.5 桂苓神术汤对正常大鼠的利尿作用

2.2.6 桂苓神术汤利尿活性部位的筛选

2.2.7 统计学方法

2.3 结果与讨论

2.3.1 动物模型的选择

2.3.2 剂量的确定

2.3.3 桂苓神术汤和苓桂术甘汤对盐水负荷大鼠尿量的影响

2.3.4 桂苓神术汤对正常大鼠的影响

2.3.5 桂苓神术汤不同极性部位对大鼠尿量的影响

2.4 本章小结

第三章 桂苓神术汤及其活性部位利尿作用机制初步研究

3.1 仪器与材料

3.1.1 仪器

3.1.2 动物

3.1.3 试剂

3.1.4 药材

3.2 实验方法

3.2.1 桂苓神术汤水提液的制备

3.2.2 桂苓神术汤不同极性部位的制备

3.2.3 动物的筛选

3.2.4 桂苓神术汤的利尿作用

3.2.5 桂苓神术汤不同极性部位的利尿作用

3.2.6 统计学方法

3.3 结果与讨论

3.3.1 桂苓神术汤对大鼠尿液pH及Na+、K+、Cl-浓度的影响

3.3.2 不同极性部位对大鼠尿液pH及Na+、K+、Cl-浓度的影响

3.4 本章小结

第四章 桂苓神术汤利尿活性部位指纹图谱研究及其与组方药味的相关性分析

4.1 仪器与材料

4.1.1 仪器

4.1.2 材料

4.2 实验方法

4.2.1 供试品的制备

4.2.2 HPLC分析条件

4.3 结果与讨论

4.3.1 色谱条件的选择

4.3.2 方法学考察

4.3.3 HPLC指纹图谱的建立及相似度评价

4.3.4 桂苓神术汤乙酸乙酯部位与组方药味的相关性分析

4.4 本章小结

第五章 桂苓神术汤利尿活性部位主要化学成分分析

5.1 仪器与材料

5.1.1 仪器

5.1.2 材料

5.2 实验方法

5.2.1 供试品的制备

5.2.2 分析条件

5.3 结果与讨论

5.3.1 酸乙酯部位HPLC色谱图

5.3.2 HPLC-MS分析结果

5.3.3 色谱峰中化学成分的鉴定

5.4 本章小结

第六章 全文总结与展望

6.1 主要结论

6.2 展望

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表论文

附 录