自身免疫性甲状腺疾病患者体内滤泡辅助性T淋巴细胞的变化

摘要

目的:通过研究自身免疫性甲状腺疾病(autoimmune thyroid disease,AITD)患者体内滤泡辅助性T淋巴细胞(follicular helper T cell,Tfhcell)的变化,探讨Tfh细胞在AITD致病机制中发挥的作用。
　　 方法:
　　 1.采用流式细胞术(flow cytometer,FCM)检测AITD(36例Graves病和29例桥本甲状腺炎)患者和健康对照者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中Tfh细胞的比例,并进行比较。
　　 2.应用化学发光免疫分析法检测AITD患者的抗甲状腺过氧化物酶抗体(anti-thyroperoxidase antibody,TPO-Ab)、抗促甲状腺激素受体抗体(anti-TSH receptor antibody,TSHR-Ab)和抗甲状腺球蛋白抗体(anti-thyroglobulin antibody,Tg-Ab)的水平,以及游离三碘甲腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)、游离甲状腺素(free thyroxine,FT4)的水平,分析各种抗体水平,激素水平与Tfh细胞比例的相关性。
　　 3.追踪随访8例Graves病(Graves’disease,GD)患者,通过FCM检测患者治疗前后Tfh细胞比例的变化情况。
　　 4.磁珠分选人PBMC中CD4+T细胞,用植物血细胞凝集素(phytohemagglutinin,PHA)刺激后,采用实时荧光定量PCR(real-timefluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测患者和健康对照者CD4+T细胞中IL-21和Bcl-6 mRNA的相对表达情况。酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测CD4+T细胞培养上清中IL-21的分泌情况。
　　 5.取5例桥本甲状腺炎(Hashimoto thyroiditis,HT)患者甲状腺组织,进行病理切片,免疫荧光染色后,采用激光共聚焦显微镜观察CD4+CXCR5+细胞的分布情况。分离甲状腺组织单个核细胞(thyroidmononuclear cell,TMC),FCM检测CD4+CXCR5+T淋巴细胞上ICOS的表达情况;RT-PCR检测TMC中IL-21和Bcl-6 mRNA的相对表达情况。
　　 结果:
　　 1.以CD4+CXCR5+ICOShigh或CD4+CXCRS+PD-1high来标记外周血中Tfh细胞;GD组、HT组与健康对照组相比,Tfh细胞的比例均有明显上调(P＜0.05;P＜0.05)。
　　 2.GD组和HT组患者具有较高水平的相关自身抗体。GD组患者血清TSHR-Ab、TPO-Ab水平分别与外周血中的Tfh细胞的比例具有正相关性(P=0.0130,r=0.4893;P=0.0341,r=0.4253);HT组患者血清Tg-Ab、TPO-Ab水平分别与外周血中的Tfh细胞的比例具有正相关性(P=0.0168,r=0.5152;P=0.0417,r=0.4479)。
　　 3.GD组患者具有较高的FT3和FT4水平,血清FT3、FT4水平分别与外周血中的Tfh细胞的比例具有一定的正相关性(P=0.0305,r=0.4332;P=0.0611,r=0.3798)。
　　 4.跟踪随访了8例GD患者,其中有4例患者治疗后外周血中Tfh细胞的比例有不同水平的降低。
　　 5.GD组和HT组患者外周血中CD4+T细胞的IL-21 mRNA相对表达水平均显著高于健康对照组(P＜0.001;P＜0.05),CD4+T细胞培养上清中IL-21的表达水平均显著高于健康对照组(P＜0.05;P＜0.001),但两组Bcl-6 mRNA的相对表达量与健康对照组相比,并无显著性差异。
　　 6.在HT患者甲状腺组织局部观察到CD4+CXCR5+T淋巴细胞的存在,并且这群细胞高表达共刺激分子ICOS;与单纯性甲状腺肿患者相比,HT患者TMC中具有较高的IL-21和Bcl-6 mRNA相对表达水平。
　　 结论:
　　 1.在AITD(Graves病和HT)患者外周血中观察到了Tfh细胞(CD4+CXCR5+ICOShighT细胞)比例的增加,在HT患者甲状腺中也观察到Tfh细胞的存在。
　　 2.在Graves病和HT患者体内,Tfh细胞的比例与TSH-Ab、Tg-Ab和TPO-Ab的水平成正相关,并且对于GD患者,Tfh细胞的比例与血清中FT3、FT4成一定水平的正相关;部分治疗后GD患者的Tfh细胞的比例下降。以上结果提示Tfh细胞可能参与AITD的致病过程中,并反映AITD的病情严重程度。