中药单体芦荟大黄素治疗非酒精性脂肪性肝炎的作用机制

摘要

研究目的：
　　研究中药单体芦荟大黄素(aloe emodin，AE)治疗非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholicsteatohepatitis，NASH)的作用机制，为AE治疗NASH的临床应用提供理论依据。
　　研究方法：
　　1.1小鼠NASH造模分组:昆明小鼠66只，正常喂养一周，在活动、进食、粪便均无异常的情况下随机分为两组:小鼠NASH模型组（56只）和正常对照组（10只）。NASH模型组予以低蛋白高脂饲料喂养8周。正常对照组给予基础饲料喂养。
　　1.2 AE对小鼠NASH的治疗分组:8周后，随机从造模组取出6只，验证造模成功。将NASH造模组的小鼠按体重层次随机分为5组，每组10只。(1) AE低剂量组（20mg·kg-1·d-1）;(2) AE中剂量组（40mg·kg-1·d-1）;(3) AE高剂量组(80mg·kg-1·d-1);(4)茴三硫阳性对照组(15.626mg·kg-1·d-1);(5) NASH模型组。(1)(2)(3)(4)组予以生理盐水+相应药物灌胃，1次/天，连续4周:(5)予以生理盐水20 ml·kg-1·d-1灌胃，连续四周。(1)(2)(3)(4)(5)均予以高脂饲料喂养，自由饮水。
　　1.3实验处理方法及指标测定:(1):实验期间观察小鼠的一般情况;(2):实验结束前一天从晚上8点开始禁食;(3)禁食12小时后，摘眼球取血，3000rpm/min，离心5分钟，取上清液，0-4℃保存，检测血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase，AST)、甘油三酯(triglyceride，TG)，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、坏死因子-α(tumor necrosis factor，TNF-α)、内毒素(endotoxin，ET)等含量。(4)取小鼠肝脏同一部位，HE染色后光镜下观察肝组织病理情况。
　　研究结果：
　　(1)一般情况:在整个造模过程中各组小鼠均未发生意外性死亡。正常对照组小鼠:进食、饮水、大小便正常，毛发密且有光泽，体重增长较快;NASH模型组小鼠:一般情况较好，体重快速增加，6周后小鼠食欲减退，但体重仍有小幅度增加，8周后，体重较正常对照组明显增加((P＜0.05)，但精神状态较差，毛发光泽减弱，活动减少。
　　(2)小鼠血清生化指标ALT、AST、TG的测定:与正常对照相比，NASH模型组小鼠血清AST、ALT、TG水平明显升高(P＜0.01);与NASH模型组相比，AE各治疗组及茴三硫组NASH小鼠血清AST、ALT水平、TG含量显著降低(P＜0.01)，其中AE高剂量组疗效最明显(P＜0.01)，且与茴三硫组作用程度相当(P＞0.05)。
　　(3)小鼠血清SOD活性及MDA含量的测定:与正常对照组相比，NASH模型组小鼠血清SOD活性明显降低，MDA水平明显升高(P＜0.01);与NASH模型组相比，AE各治疗组及茴三硫组可明显增强NASH小鼠血清SOD活性，降低MDA含量(P＜0.01)，随着AE剂量的增加，疗效也越明显，高剂量组作用与茴三硫疗效相当(P＞0.05)。
　　(4)小鼠血清TNF-α、ET的测定:与正常对照组相比，NASH模型组小鼠血清TNF-a，ET显著增高(P＜0.01);各治疗组与NASH模型组相比，NASH小鼠血清TNF-a，ET不同程度的下降(P＜0.01)，AE低、中、高剂量组之间比较，高、中剂量组疗效优于低剂量组(P＜0.01)，且AE高剂量组、中剂量组与茴三硫组疗效相当(P＞0.05)。
　　(5) HE染色结果:正常对照组:肝组织结构正常，肝小叶清晰，肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列。肝细胞细胞核圆，胞浆丰富，无炎细胞浸润。NASH模型组:超过70％的肝细胞发生脂肪变性，变性细胞胞浆内充满大小不一的球形脂滴空泡，主要为大泡变性，大者可充满整个细胞而将细胞核挤至一侧，也有部分为小泡性脂肪变性，90％以上的肝细胞伴有炎症细胞浸润，以小叶内炎症为主，无坏死、纤维化。AE低剂量组:超过60％的肝细胞发生大泡脂肪变性，较大者的圆形脂滴可将细胞核挤都一边，细胞胞浆内的脂滴数量稍减少，但仍有炎症细胞浸润，无坏死、纤维化等。AE中剂量组:约35％-50％的肝细胞发生大泡脂肪变性，部分小泡性脂肪变，脂滴占细胞胞浆体积近一半，部分细胞无炎症细胞浸润。AE高剂量组:约25％的肝细胞内小泡性脂肪变，脂滴体积小，数量少，以小叶中央部脂变较明显。茴三硫组:约20％-25％肝细胞发生脂肪变性，主要为小泡性变性，且胞浆内的脂滴数量较少，少量炎症细胞浸润，无明显坏死、纤维化。
　　结论：
　　这个课题在于研究AE治疗NASH的作用机制，通过一系列的实验研究可以证明AE对NASH有明显的治疗效果，可以显著改善肝功能、脂质代谢紊乱，减轻肝细胞脂肪变性、炎症浸润等。

目录

声明

摘要

英文缩写索引

第一章 绪论

1．1 前言

1．2 与NASH相关的指标的意义

1．2．1 氧化应激指标：SOD、MDA

1．2．2 TNF-α

1．2．3 ET

第二章 实验材料、方法和设计

2．1 实验材料

2．1．1 实验动物和饲料

2．1．2 实验主要试剂

2．1．3 主要仪器设备

2．2 实验方法

2．2．1 NASH小鼠模型的建立及实验分组

2．2．2 标本的收集

2．2．3 一般情况的观察

2．2．4 血清肝酶、血脂、促炎症因子等的检测

2．2．5 肝组织HE染色

2．2．6 数据处理与统计

2．3 实验方案设计

第三章 实验结果

3．1 各组小鼠一般情况及体重变化

3．2 血清肝酶、血脂、促炎因子等血清标记物的变化

3．2．1 各组小鼠血清生化指标AST、ALT、TG的变化

3．2．2 各组小鼠血清氧化指标SOD、MDA水平的变化

3．2．3 各组小鼠血清TNF-a、ET水平的变化

3．3 肝组织病理学的变化

第四章 讨论

第五章 主要结论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文

附录