膜分离方法制备免疫活性大豆肽的研究

摘要

大豆肽无论在营养特性、加工特性还是生理功能上都有其独特之处，在食品工业中具有十分广泛的用途。本论文采用膜分离方法处理Alcalase蛋白酶水解大豆蛋白制得的大豆肽，对大豆粗肽液的澄清处理、大豆肽液超滤的工艺优化和超滤膜富集免疫活性大豆肽，以及大豆肽液纳滤脱盐的分离特性进行了系统的研究，目的是为免疫活性大豆肽的工业化生产提供一种供参考的途径。 在大豆粗肽液的澄清处理实验中，以经处理后肽液的蛋白得率、TCA溶解度、浊度为研究对象比较了微滤和板框过滤两种处理方式对大豆肽液性质的影响。结果表明：两种处理方式均能达到对粗大豆肽液进行除杂，得到澄清大豆肽液的目的。经两种处理方式处理后所得到的肽液在 TCA 溶解度、浊度等方面性质相差不大，微滤处理蛋白得率较板框过滤处理高。 在大豆肽液超滤处理实验中，对大豆肽的超滤膜分离特性进行研究，考察了不同操作压力、温度，不同料液浓度、pH值对超滤膜通量的影响；考察了膜孔径、材料，料液pH值对大豆肽分子量分布和碱性肽相对含量的影响及大豆肽超滤处理前后对小鼠体外免疫功能的影响。结果表明：从通量来看，截留分子量为8000和5000的超滤膜的最佳操作参数分别为：操作压力0.55MPa、料液温度 40℃、料液pH值7.0、操作时间周期180min；操作压力0.55MPa、料液温度40℃、料液 pH 值4.0、操作时间周期180min。大豆肽本身具有免疫增强作用，而经过一定条件的超滤膜处理后，大豆肽的免疫增强作用得到了显著提高。其中在pH4.0条件下采用MWC05000超滤膜处理后的大豆肽其促进巨噬细胞吞噬异物的能力和促进小鼠淋巴细胞增殖能力均为最强。 在大豆肽纳滤脱盐实验中，考察了纳滤膜对大豆肽液除盐的分离过程中的肽液N及Cl<'->含量的变化情况。结果表明：采用截留分子量为150的纳滤膜能较好地用于大豆肽液的脱盐，经过采用非连续间歇恒容脱盐方法，总脱盐率能达到81.46％，而肽液中N浓度也从5g/L浓缩到24.57g/L，说明利用该过程对大豆肽液有较好的脱盐浓缩效果，能较好的满足实际生产要求。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章绪论

1.1大豆活性肽简介

1.1.1大豆活性肽的功能特性

1.1.2大豆活性肽开发研究与应用现状

1.2膜分离技术及应用

1.2.1超滤技术及其特点

1.2.2纳滤技术及其特点

1.3本课题的立题依据

1.4本课题的主要研究内容

第二章大豆肽液的制备及其澄清处理研究

2.1引言

2.2实验材料与设备

2.2.1主要材料

2.2.2主要仪器

2.3实验方法

2.3.1原料的制备

2.3.2基本成分的测定

2.3.3粗肽液的澄清处理

2.3.4三氯乙酸氮溶解指数(TCA溶解度)测定

2.3.5酸性肽/碱性肽分布(离子交换色谱)

2.3.6相对分子质量测定(高效液相色谱)

2.4结果与讨论

2.4.1大豆蛋白预处理方法确定

2.4.2粗肽液的基本成分、TCA溶解度及浊度

2.4.3大豆肽液的微滤澄清处理

2.4.4大豆肽液的板框过滤澄清处理

2.4.5大豆肽液澄清处理后分子量分布

2.4.6大豆肽液澄清处理后酸性肽/碱性肽分布

2.5本章小结

第三章超滤处理富集免疫活性大豆肽的研究

3.1引言

3.2实验材料与设备

3.2.1主要材料

3.2.2主要仪器

3.3实验方法

3.3.1超滤处理

3.3.2不同操作压力对超滤膜通量的影响

3.3.3不同操作温度对超滤膜通量的影响

3.3.4不同料液浓度对超滤膜通量的影响

3.3.5不同料液pH对超滤膜通量的影响

3.3.6酸性肽/碱性肽分布(离子交换色谱)

3.3.7分子量测定(高效液相色谱)

3.3.8腹腔巨噬细胞吞噬试验——吞噬中性红试验

3.3.9脾淋巴细胞增殖实验——MTT法

3.3.10数据处理

3.4结果与讨论

3.4.1不同操作压力对超滤膜通量的影响

3.4.2不同料液温度对超滤膜通量的影响

3.4.3不同料液浓度对膜通量的影响

3.4.4不同及料液pH对膜通量的影响

3.4.5大豆肽超滤前后相对分子质量分布及正电荷肽含量

3.4.6不同大豆肽对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响

3.4.7不同大豆肽对小鼠脾细胞增殖能力的影响

3.5本章小结

第四章纳滤处理对大豆肽脱盐的研究

4.1引言

4.2实验材料与设备

4.2.1主要材料

4.2.2主要仪器

4.3实验方法

4.3.1纳滤处理

4.3.2纳滤膜的纯水透过系数

4.3.3压力对纳滤膜通量的影响

4.3.4 Cl-浓度的测定

4.3.5压力对脱盐率的影响的测定

4.3.6肽液渗滤脱盐

4.4结果与讨论

4.4.1纳滤膜的纯水透过系数

4.4.2压力对纳滤膜通量的影响

4.4.3压力对纳滤膜Cl-截留率的影响

4.4.4肽液渗滤脱盐

4.4.5不同渗滤操作的比较

4.5本章小结

结论

展望

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表论文清单