葛根美白活性物质的分离提取及在化妆品中的应用

摘要

本课题主要对中草药葛根中含有的对皮肤具有美白活性的物质进行了研究，包括葛根有效成分的提取，提取工艺的优化，和对美白活性成分进行分离纯化，并进一步探讨了葛根提取物对酪氨酸酶抑制作用的类型和机理，最后对葛根提取物作了一些应用研究。 对葛根，金银花，六月雪和柿叶四种常用中草药分别通过水和乙醇回流提取、浓缩、低温烘干。采用生化酶法测定各提取物的美白活性。分别测定它们的水提取物和乙醇提取物的美白活性，得到葛根的水提物和乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制作用强于其它几种中草药的提取物。采用单因素实验法，考察了缓冲溶液的pH值、L-酪氨酸的量、酪氨酸酶的量、恒温时间和反应时间这五个因素对美白功效实验体系的影响，得到最佳实验条件是：pH值为6.85、L-酪氨酸溶液的量为1.0mL、酪氨酸酶的量为0.40mL、恒温时间为10min、反应时间为5min。 采用三因素四水平正交试验法对葛根乙醇提物的提取条件进行优化，得到最佳工艺条件为：乙醇浓度为75％、回流时间4h、料液比1:8、提取次数2次。并绘制了葛根素标准品的标准曲线，测定了正交实验中9次实验得到的葛根提取物的黄酮含量。 将葛根的乙醇提取物通过不同极性的溶剂萃取，浓缩后得粗提物，对各粗提物进行酪氨酸酶抑制率的测定，得到葛根的乙酸乙酯萃取物对酪氨酸酶的抑制作用最强。然后用常压硅胶柱层析法对该萃取物作梯度洗脱，用硅胶G薄板进行TLC检测，跟踪洗脱情况，得到A～J共10个洗脱物，再分别对这些洗脱物进行酪氨酸酶抑制率的测定。从测定结果得到，从葛根中分离得到两个组分B和D对酪氨酸酶的抑制率较高，分别为65.7％和79.2％。对B进行第二次柱层析，得到了对酪氨酸酶抑制作用明显的B3，它对酪氨酸酶的抑制率为92.3％。对D组分进行第二次柱层析后，得到对酪氨酸酶抑制作用最强的是D4，它对酪氨酸酶的抑制率达98.5％。 对B3和D4进行高效液相色谱、紫外色谱，液质联用色谱检测，并与标准品对比，推断大豆苷元和葛根素分别为中草药葛根中的主要美白成分。 研究葛根提取物抑制酪氨酸酶活性的动力学，发现葛根素对酪氨酸酶的抑制类型为非竞争性抑制。 将葛根素添加入膏霜中，用α-熊果苷作阳性对照，通过对15位实验者进行3个月的人体实验，得到添加葛根素的膏霜具有较好的皮肤美白效果。 采用滤纸片法测定葛根提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果，得到葛根素对两种菌的抑菌效果影响不明显，而葛根醇提物对大肠杆菌的抑菌效果更明显。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章综述

前言

第一节黑色素形成机理及美白机理

1.1黑色素形成的化学机理

1.2化妆品美白剂的美白机理

第二节化妆品美白剂的美白功能和功能评价方法

2.1化妆品美白剂的美白功能

2.2化妆品美白剂的美白祛斑功效评价方法

第三节化妆品美白剂的种类和发展

第四节中药葛根的资源和生物活性

4.1葛根资源

4.2葛根的化学成分

4.3葛根的应用

第五节中药葛根有效成分的提取方法

5.1加热回流法

5.2渗漉法

5.3浸渍法

5.4纤维素酶法

5.5微波辅助萃取

5.6超临界流体萃取法

第六节结论和立题依据

第二章中草药原料的初步筛选和生化酶法测定条件的优化

引言

第一节酪氨酸酶的制备

1.1试剂与仪器

1.2实验方法

1.3结果与讨论

1.4小结

第二节中草药的筛选

2.1试剂与仪器

2.2实验方法

2.3结果和讨论

2.4小结

第三节生化酶法测定美白剂美白功效实验体系的优化

3.1试剂与仪器

3.2优化美白剂美白功能试验体系的单因素实验方法

3.3结果和讨论

3.4小结

第三章葛根提取工艺的研究及美白活性成分的初步分析

第一节葛根提取工艺的研究

1.1试剂与仪器

1.2实验方法

1.3实验结果

1.4小结

第二节葛根总黄酮含量的测定

2.1试剂与仪器

2.2实验方法

2.3实验结果

2.4小结

第三节葛根美白活性成分的初步分析

3.1试剂与仪器

3.2实验方法

3.3结果与讨论

3.4小结

第四章葛根美白活性物质的分离纯化和成分推测

第一节葛根美白活性物质的分离纯化

1.1试剂与仪器

1.2实验方法

1.3结果与讨论

1.4小结

第二节美白活性成分的HPLC、UV检测和LC-MS分析

引言

2.1试剂与仪器

2.2实验方法

2.3结果与讨论

2.4小结

第五章葛根提取物在化妆品中的应用研究

第一节葛根素抑制酪氨酸酶活性的动力学研究

引言

1.1试剂与仪器

1.2实验方法

1.3结果与讨论

1.4小结

第二节葛根素在膏霜中应用的美白效果

引言

2.1试剂与仪器

2.2实验方法

2.3结果与讨论

2.4小结

第三节葛根提取物的抑菌效果

引言

3.1试剂与仪器

3.2实验方法

3.3结果与讨论

3.4小结

第六章结论

致谢

参考文献

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