赤麂Y染色体的鉴别以及Sry基因的初步定位、克隆及测序

摘要

雄性小麂、雌雄赤麂细胞株均由中国科学院昆明动物研究所细胞库惠赠,常规细胞培养,提取赤麂基因组DNA,制作中期染色体,显微切割雄性赤麂Y<,1>、Y<,2>、1号染色体.分别在雄性赤麂Y<,2>染色体DNA和雄性赤麂基因组DNA扩增出221bpSry基因片段,在雄性赤麂Y<,1>、1号染色体及雄性赤麂基因组DNA未见特异性扩增带.用T-A互补克隆法将赤麂SRY基因的扩增产物克隆到pGEM-Tvector中,转化DH5α菌,通过α互补筛选和菌落PCR验证,挑选出阳性克隆.质粒或菌种均可用于测序.通过DOP-PCR,以biotin-16-dUDP标记流式细胞仪分离的小麂Y染色体.以标记好的小麂的Y染色体DOP-PCR扩增产物为探针,分别与雌、雄赤麂中期染色体进行染色体涂染.结果表明赤麂的性别决定相关染色体是Y<,2>染色体而不是其它染色体.

目录

绪言

第一章材料与方法

1.1细胞培养

1.2中期染色体核型的制备

1.3染色体显微切割

1.4流式细胞仪分离染色体

1.5赤麂细胞基因组DNA的提取

1.6 PCR

1.6.1 DOP-PCR

1.6.2染色体特异性涂染探针的制备

1.6.3赤麂Sry 基因 HMG Box 的PCR

1.6.4 PCR产物克隆测序

⒈ 7染色体涂染(Chromosome painting)

第二章结果

2.1细胞培养

2.2赤麂中期染色体核型

2.3染色体显微切割

2.4 DOP-PCR扩增结果

2.5雄性赤麂Sry HMG boxPCR扩增、测序结果

2.6染色体涂染结果

附测序图

第三章讨论

3.1染色体显微切割

3.2 变性寡核苷酸引物PCR

3.3染色体涂染

3.4 SRY基因与赤麂的性别决定

结论

致谢

参考文献

作者在学期间发表的论文清单