黄色黏细菌发育基因fruA表达调节的机制研究

摘要

目的： 粘细菌是具有社会性行为的一类原核生物，作为研究多细胞结构形成机制的一种良好模型。FruA是一种粘细菌发育所必需的转录因子，影响着其他一系列发育特异性基因的表达。前期工作中我们发现fruA mRNA5′-UTR对自身基因在发育时期的表达起正性调控作用，但尚不能确定5′-UTR是在转录后水平调节fruA发育特异性表达，本论文进一步研究5′-UTR调节疗fruA表达的分子机制。鉴于FruA是一种转录因子，本论文还将研究fruA基因表达是否存在反馈调节。 方法： 1、5′-UTR调节fruA表达的机制 首先构建fruA-lacZ转录融合载体。将保留或缺失5′-UTR的2个fruA片段F1和F2分别克隆至以lacZ为报告基因的转录融合载体，构建成与翻译融合载体(吴倩等，2004)相对应的两种fruA-lack砖录融合载体，载体中加入粘细菌Mx8 attP片段后经电穿孔分别导入粘细菌野生株DKl622，Southem杂交确认载体整合于染色体attB位点，得到DKl622/pMF1A(UTR<'+>)和DKl622/pMF2A（UTR)两种转录融合体。测定两种fruA-lacZ的转录融合载体的B-半乳糖苷酶活性，与相对应的翻译融合体的β-半乳糖苷酶活性比较，明确5′-UTR在何种层次(转录或转录后)调节fruA的表达。 2、FruA对疗fruA基因表达是否存在反馈调节 从黄色粘细菌模式菌株DKl622中经同源重组途径敲除fruA，再将野生型fruA-lacZ录融合体导入fruA敲除菌株的attB位点，分别测定fruA-lacZ在fruA野生株和突变株中β-半乳糖苷酶的表达活性。 结果： 1．粘细菌发育过程中，5′-UTR阳性fruA-lacZ转录和翻译融合体之间β-半乳糖苷酶活性无差异；5′-UTR阴性fruA-lacZ翻译融合体β-半乳糖昔酶活性完全消失；5′UTR阴性fru-lacZ转录融合体β-半乳糖苷酶活性并未完全消失，其在不同发育时间点的活性大约是5′4JTR阳性fruA-lacZ．跨录融合体的50﹪。2。Southern杂交分析表明fru敲除菌株构建正确，DK1622ΔfruA发育48小时后仍不能形成成熟子实体：fruA调控序列完整的fruA-lacz转录融合体β-半乳糖苷酶活性在DKl622和DKl622△fruA之间无明显差异。 结论：(1)5′-UTR影响fruAmRNA翻译，同时5′-UTR可以通过影响转录和/或mRNA稳定性调节自身基因的表达。(2)FruA对自身基因表达无反馈调节作用。

目录

文摘

英文文摘

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前言

文献综述 粘细菌基因表达调控的特点

第一章材料与方法

第二章实验结果

第三章讨论

第四章结论

致谢

参考文献

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